Litlhahiso tse 'maloa tsa phetoho historing ea theknoloji ea ho lemoha kelellong ea ka ke theknoloji ea immunolabeling e thehiloeng ho molao-motheo oa ho tlama ha antigen-antibody, theknoloji ea PCR le theknoloji ea tatellano.Kajeno re tla bua ka theknoloji ea PCR.Ho latela phetoho ea theknoloji ea PCR, batho ba tloaetse ho arola theknoloji ea PCR ka meloko e meraro: theknoloji e tloaelehileng ea PCR, theknoloji ea nako ea nnete ea fluorescent quantitative PCR le theknoloji ea PCR ea dijithale.
Cmokhoa o tloaelehileng oa PCR
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Kary Mullis o ile a qapa polymerase chain reaction (polymerase chain reaction , PCR) ka 1983. Ho boleloa hore ha a ntse a khanna kharebe ea hae, ka tšohanyetso o ile a ba le khanya ea pululelo 'me a nahana ka molao-motheo oa PCR (ka melemo ea ho khanna).Kary Mullis o ile a fuoa Khau ea Nobel Thutong ea K’hemistri ka 1993. The New York Times e ile ea hlalosa: “Ke ea pele haholo le ea bohlokoa, e batlang e arola baeloji ka mehla ea pele ho PCR le ea ka morao ho PCR.
Molao-motheo oa PCR: Tlas'a catalysis ea DNA polymerase, 'mè oa strand DNA e sebelisoa e le thempleite,' me primer itseng e sebelisoa e le qalo ea katoloso, 'me morali oa Strand DNA tlatselletsa ho 'mè Strand thempleite DNA e kopitsoa in vitro ka denaturation, annealing, katoloso le mehato e meng.Ke theknoloji ea DNA synthesis amplification in vitro, e ka holisang ka potlako le ka mokhoa o ikhethileng sepheo sefe kapa sefe sa DNA in vitro.
Melemo ea PCR e tloaelehileng
1.Mokhoa oa khale, litekanyetso tse feletseng tsa machaba le tsa malapeng
2.Theko e tlase ea li-reagents tsa lisebelisoa
3.Lihlahisoa tsa PCR li ka fumanoa bakeng sa liteko tse ling tsa baeloji ea limolek'hule
Mochini o khothalelitsoeng oa Foregene PCR: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Lihlahisoa tse amanang: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Mefokolo ea PCR e tloaelehileng
1.bonolo ho silafatsa
2.ts'ebetso e boima
3.feela tlhahlobo ea boleng
4.Boikutlo bo itekanetseng
5.Ho na le amplification e seng e khethehileng, 'me ha sehlopha se sa khetheheng se lekana le sehlopha se lebeletsoeng, se ke ke sa khetholloa.
CApillary electrophoresis-based PCR
E le ho arabela mefokolo ea PCR e tloaelehileng, bahlahisi ba bang ba hlahisitse lisebelisoa tse thehiloeng ho molao-motheo oa capillary electrophoresis.Mohato oa electrophoresis ka mor'a hore PCR amplification e phethoe ka capillary.Kutloisiso e phahame, 'me phapang ea metheo e mengata e ka khetholloa mme ho holisoa ho ka baloa ke MAERKER.dikahare tsa sehlahisoa.Bothata ke hore sehlahisoa sa PCR se ntse se hloka ho buloa le ho kenngoa ka har'a sesebelisoa, 'me ho ntse ho e-na le kotsi e kholo ea ho silafala.
CapillaryElectrophoresis
2. Theknoloji ea nako ea 'nete ea fluorescent quantitative PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR)Fluorescent quantitative PCR, eo hape e bitsoang Real-Time PCR, ke theknoloji e ncha ea nucleic acid quantitative e entsoeng ke PE (Perkin Elmer) ka 1995. Histori ea tsoelo-pele ea fluorescent quantitative PCR ke histori ea lintoa tse susumetsang moea tsa linatla tse kang ABI, Roche, le Bio-Rad.Haeba u thahasella, u ka e hlahloba.Mokhoa ona hajoale ke mokhoa oa PCR o holileng ka ho fetesisa le o sebelisoang haholo oa semi-quantitative.
Mochine oa qPCR o khothalelitsoeng:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Mokhoa oa ho daea ka fluorescent (SYBR Green I):SYBR Green I ke dae e tlamang DNA e sebelisoang haholo bakeng sa palo ea PCR, e kopanyang DNA e nang le mela e 'meli ka ho khetheha.Sebakeng se lokolohileng, SYBR Green e hlahisa fluorescence e fokolang, empa hang ha e tlameletsoe ho DNA e nang le likarolo tse peli, fluorescence ea eona e eketseha ka makhetlo a 1000.Ka hona, lets'oao lohle la fluorescent le hlahisoang ke karabelo le lekana le palo ea DNA e nang le likhoele tse peli 'me le tla eketseha ka keketseho ea sehlahisoa se holisitsoeng.Kaha dae e tlamella ka mokhoa o sa tobang ho DNA e nang le likhoele tse peli, ho ka hlahisoa litholoana tse ntle tse fosahetseng.
Lihlahisoa tse amanang: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Mokhoa oa ho hlahloba ka fluorescent (theknoloji ea Taqman): Nakong eaPCR amplification, probe e khethehileng ea fluorescent e eketsoa ka nako e le 'ngoe le li-primers.The probe ke linear oligonucleotide, le sehlopha sa motlalehi oa fluorescent le sehlopha sa quencher ea fluorescent ka ho latellana se ngotsoeng lipheletsong tse peli.Ha probe e tsitsitse, letšoao la fluorescent le hlahisoang ke sehlopha sa moqolotsi oa litaba le kenngoa ke sehlopha sa quencher, 'me ho lemoha Ha ho na lets'oao la fluorescent;nakong ea ntlafatso ea PCR (sethaleng sa katoloso), ts'ebetso ea 5'-3 'Dicer ea enzyme ea Taq e tla cheka le ho senya probe, e le hore sehlopha sa motlalehi oa fluorescent le sehlopha sa quencher fluorescent se arohane, e le hore tsamaiso ea tlhokomelo ea fluorescence Letšoao la fluorescent le ka amoheloa, ke hore, nako le nako ha molek'hule ea DNA e lemoha hore ketane ea DNA e thehoa, ketane e feletseng e thehoa, pokello ea matšoao a fluorescent le ho thehoa ha lihlahisoa tsa PCR.Mokhoa oa ho hlahloba oa Taqman ke mokhoa o sebelisoang haholo ho sibolla kliniki.
Lihlahisoa tse amanang: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Melemo ea qPCR
1.Mokhoa o hōlile 'me lisebelisoa tse tšehetsang le li-reagents li felile
2.Litsenyehelo tse mahareng tsa li-reagents
3.bonolo ho sebelisa
4.Boikutlo bo phahameng ba ho lemoha le ho hlaka
Mathata a qPCR
Phetoho ea phatsa ea lefutso e lebisang ho se hlokomeleheng.
Sephetho sa ho lemoha ha template ea concentration e tlaase ha se tsejoe.
Ho na le phoso e kholo ha ho sebelisoa curve e tloaelehileng bakeng sa phumano ea bongata.
3. Digital PCR (digital PCR, dPCR) thekenoloji
Digital PCR ke mokhoa oa ho lekanya palo e felletseng ea limolek'hule tsa nucleic acid.Ha ho bapisoa le qPCR, PCR ea dijithale e ka bala ka kotloloho palo ea limolek'hule tsa DNA/RNA, e leng palo e felletseng ea limolek'hule tsa nucleic acid sampoleng e qalang.Ka 1999, Bert Vogelstein le Kenneth W. Kin-zler ba ile ba hlahisa maikutlo a dPCR ka molao.
Ka 2006, Fluidigm e bile eona ea pele ea ho hlahisa sesebelisoa sa dPCR se thehiloeng ho chip.Ka 2009, Life Technologies e ile ea tsebisa litsamaiso tsa OpenArray le QuantStudio 12K Flex dPCR.Ka 2013, Life Technologies e ile ea qala mokhoa oa QuantStudio 3DdPCR, o sebelisang theknoloji e phahameng ea nanoscale microfluidic chip ho aba lisampole ka ho lekana ho lisele tse 20,000 ka bomong.ka karabelo hantle.
Ka 2011, Bio-Rad e ile ea hlahisa sesebelisoa sa QX100 dPCR se thehiloeng ho marotholi, se sebelisang theknoloji ea metsi ka har'a oli ho aba sampole ka ho lekana ho 20,000 ea metsi-ka har'a oli, 'me e sebelisa mochine o hlahlobang marotholi ho hlahloba marotholi.Ka 2012, RainDance e ile ea hlahisa sesebelisoa sa RainDrop dPCR, se tsamaisoang ke khase e phahameng, ho arola mokhoa o mong le o mong oa karabelo ho emulsion e nang le marotholi a manyenyane a limilione tse 1 ho isa ho tse 10.
Ho fihlela hajoale, PCR ea dijithale e thehile lihlopha tse peli tse kholo, mofuta oa chip le mofuta oa marotholi.Ho sa tsotelehe hore na PCR ea dijithale ke ea mofuta ofe, melao-motheo ea eona ea mantlha e fokotsa phallo, PCR ea pheletso le kabo ea Poisson.Sistimi e tloaelehileng ea karabelo ea PCR e nang le litempele tsa nucleic acid e arotsoe ka ho lekana ka mashome a likete a likarabelo tsa PCR, tse abeloang li-chips kapa li-microdroplets, e le hore karabelo ka 'ngoe e be le molek'hule oa template kamoo ho ka khonehang, mme karabelo ea PCR ea molek'hule e le 'ngoe e etsoa.Ka ho bala fluorescence Ho ba teng kapa ho se be teng ha lets'oao ho baloa, 'me palo e felletseng e etsoa ka mor'a ho lekanya palo ea lipalo tsa Poisson.
Tse latelang ke litšobotsi tsa li-platform tse 'maloa tsa PCR tseo ke li sebelisitseng:
1. Bio-Rad QX200 droplet digital PCR Bio-RadQX200 ke sethala sa PCR sa dijithale sa khale haholo, ts'ebetso ea mantlha ea ho lemoha: lisampole tse 20,000 li hlahisoa ke jenereithara ea marotholi Marotholi a metsi a ka har'a oli a holisoa mochining o tloaelehileng oa PCR, 'me qetellong lets'oao la fluorescence la lerotholi le leng le le leng le baloa ke sebali sa marotholi a manyane.Ts'ebetso e rarahane ho feta, 'me kotsi ea tšilafalo e bohareng.
Xinyi TD1 micro-droplet digital PCRXinyi TD1 ke sethala sa PCR sa lehae sa dijithale, ts'ebetso ea mantlha ea ho lemoha: ho hlahisa marotholi a 30,000-50,000 a metsi ka oli ka jenereithara ea marotholi, ho holisa sesebelisoa se tloaelehileng sa PCR, 'me qetellong a fete Sebali sa marotholi se bala lets'oao la fluorescent la lerotholi le leng le le leng.Ka bobeli tlhahiso ea marotholi le ho bala sethaleng sena li etsoa ka chip e inehetseng e nang le kotsi e tlase ea tšoaetso.
STILLA Naica micro-droplet chip digital PCRSTILLA Naica ke sethala se secha sa PCR sa dijithale.Mokhoa oa mantlha oa ho lemoha ke: eketsa tharollo ea karabelo ho chip, kenya chip ho moloko oa marotholi a manyane le sistimi ea amplification, 'me u hlahise marotholi a manyane a 30,000.Jala holim'a chip, 'me ntlafatso ea PCR e phethoa ka chip.Ebe chip e phahamisitsoeng e fetisetsoa tsamaisong ea tlhahlobo ea ho bala ha micro-droplet, 'me letšoao la fluorescent le baloa ka ho nka litšoantšo.Kaha ts'ebetso eohle e etsahala ka chip e koetsoeng, kotsi ea tšilafalo e tlaase.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D chip digital PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D ke sethala se seng sa khale sa PCR se thehiloeng ho chip.Ts'ebetso ea eona ea mantlha ea ho lemoha ke: eketsa tharollo ea karabelo ka har'a sethala, 'me u phatlalatse tharollo ea karabelo ka ho lekana ho chip ka li-microwell tse 20,000 ka sephara., beha chip mochine oa PCR ho holisa, 'me qetellong u kenye chip ho' mali 'me u nke foto ho bala letšoao la fluorescent.Ts'ebetso e batla e rarahane, 'me ts'ebetso eohle e etsoa ka chip e koetsoeng,' me kotsi ea tšilafalo e tlaase.
5. JN MEDSYS Clarity chip digital PCR
JN MEDSYS Clarity ke sethala se secha sa PCR sa mofuta oa chip.Ts'ebetso ea eona ea mantlha ea ho lemoha ke: eketsa tharollo ea karabelo ka har'a sesebelisoa, 'me u hasanye tharollo ea karabelo ka ho lekana ho li-tubes tse 10,000 tsa PCR tse kentsoeng ka har'a tube ea PCR ka sesebelisoa.Ho chip ea microporous, tharollo ea karabelo e kena ka har'a chip ka ketso ea capillary, 'me tube ea PCR e nang le chip e behoa mochine oa PCR bakeng sa ho hōlisa,' me qetellong chip e kenngoa ho 'mali ho bala letšoao la fluorescent ka ho nka foto.Opereishene e rarahane le ho feta.Kotsi ea tšoaetso e tlase.
Litekanyetso tsa sethala ka seng sa dijithale tsa PCR li akaretsoa ka tsela e latelang:
Lipontšo tsa tlhahlobo ea sethala sa PCR sa dijithale ke: palo ea likarolo tse arohaneng, palo ea likanale tsa fluorescent, ho rarahana ha ts'ebetso le kotsi ea tšilafalo.Empa ntho ea bohlokoa ka ho fetisisa ke ho nepahala ha ho fumanoa.Mokhoa o mong oa ho lekola li-platform tsa PCR tsa dijithale ke ho sebelisa sethala sa PCR sa dijithale tse ngata ho netefatsana, 'me tsela e' ngoe ke ho sebelisa lintho tse tloaelehileng tse nang le boleng bo nepahetseng.
Melemo ea dPCR
1.Ho fihlella quantification e felletseng
2.Boikutlo bo phahameng le bo ikhethang
3.E khona ho bona likopi tse tlase
Melemo ea dPCR1. Thepa e turang le li-reagents 2. Ts'ebetso e rarahaneng le nako e telele ea ho lemoha
Hona joale, meloko e meraro ea theknoloji ea PCR e na le melemo le melemo ea eona, 'me e' ngoe le e 'ngoe e na le masimo a eona a kopo,' me ha se kamano ea hore moloko o mong o nkela o mong sebaka.Tsoelo-pele e tsoelang pele ea theknoloji e kentse matla a macha ho thekenoloji ea PCR, e e nolofalletsang ho notlolla tsela e le 'ngoe ea ts'ebeliso ka mor'a e' ngoe, ho etsa hore ho fumanoa ha nucleic acid ho be bonolo le ho nepahala.
Mohloli: Dr. Yuan o u isa tlhahlobong
Lihlahisoa tse khothalelitsoeng:
Nako ea poso: Nov-18-2022
