Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation Purification Kits ho tloha seleng
Tlhaloso ea Kit:
RNA e hloekisitsoeng haholo le ea boleng bo holimo e ka fumanoa liseleng tse fapaneng tsa setso ka metsotso e 11.
RNase-Mahala
E sebetsa ka mocheso oa kamore (15-25 ℃)
Ka DNA-Cleaning Column
Kotulo e phahameng ea RNA
Ka potlako: Qetella ho ntša ka mor'a metsotso e 11
Polokeho: Ha ho na Organic Chemical
Tlhaloso
Setsi sena se sebelisa "spin column le formula" e ntlafalitsoeng ke Foregene, e ka ntšang RNA ea boleng bo holimo le ea boleng bo holimo liseleng tse entsoeng ka lipoleiti tse 96, 24, 12 le 6.
Thepa e fana ka DNA-Cleaning Column e sebetsang hantle, e ka arolang habonolo supernatant le cell lysate, ho tlama le ho tlosa DNA ea genomic.Opereishene e bonolo ebile e boloka nako.
Teena RNA-feela Column e ka tlama RNA hantle ka foromo e ikhethang.Palo e kholo ea disampole e ka sebetswa ka nako e le nngwe.
Likarolo tsa Kit
| Sebopeho sa Kit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-Free ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-Feela Kholomo | 50 | 200 |
| DNA-Ho hloekisa Column | 50 | 200 |
| Taelo | 1 | 1 |
*Ka kopo, roala liatlana 'me u nke mehato ea ts'ireletso nakong ea ts'ebetso kaha Buffer cRL1 le Buffer RW1 li na le matsoai a chaotropic a halefisang.
Likarolo le melemo
■ Tshebetso eohle e sebetsa mocheso oa kamore (15-25 ℃), ntle le ho hlatsoa leqhoa le mocheso o tlaase oa centrifugation.
■ Thepa eohle ha e na RNase-Free, ha ho hlokahale hore u tšoenyehe ka ho senyeha ha RNA.
■ DNA-Cleaning Column ka ho khetheha e tlama DNA, e le hore khiti e ka tlosa tšilafalo ea DNA ea genomic ntle le ho eketsa DNase e eketsehileng.
■ Poelo e phahameng ea RNA: Kholomo ea RNA feela le foromo e ikhethang e ka hloekisa RNA hantle.
■ Lebelo le potlakileng: ho bonolo ho sebetsa mme le ka phethoa ka metsotso e 11.
■ Polokeho: Ha ho hlokahale reagent ea tlhaho.
■ Boleng bo phahameng: RNA e hloekisitsoeng e hloekile haholo, ha e na protheine le litšila tse ling, ’me e ka kopana le liteko tse sa tšoaneng tse latelang.
Sesebelisoa sa Kit
E loketse ho ntšoa le ho hloekisoa ha RNA e felletseng ho tsoa liseleng tse hlahisitsoeng ka har'a lipoleiti tse 96, 24, 12 le 6 tsa seliba.
Phallo ea mosebetsi
Setšoantšo
Sets'oants'o sa betri ea gel ea agarose ea Cell Total RNA Isolation Kit se tšoere linomoro tse kaholimo tse fapaneng tsa lisele, 20μl bophahamo ba modumo, nka 2μl e hloekisitsoeng RNA 1%.
Polokelo le shelf bophelo
Thepa e ka bolokoa likhoeli tse 12 mocheso oa kamore (15-25 ℃) kapa 2-8 ℃ nako e telele (likhoeli tse 24).
Buffer cRL1 e ka bolokoa ho 4 ℃ bakeng sa khoeli e le 'ngoe ka mor'a ho eketsa 2-hydroxy-1-ethanethiol(khetho).
RNA ha e ntšoe kapa lihlahisoa tsa RNA li tlase
Hangata ho na le lintlha tse fapaneng tse amang ts'ebetso ea ho hlaphoheloa, joalo ka: dikahare tsa RNA tsa sampole, mokhoa oa ts'ebetso, bophahamo ba molumo, jj.
1. Ho hlatsoa leqhoa kapa cryogenic (4 ° C) centrifugation e ne e etsoa nakong ea ts'ebetso.
Keletso: Sebetsa ka mocheso oa kamore (15-25 ° C) ho pholletsa le ts'ebetso eohle, u se ke ua hlatsoa leqhoa le centrifuge ka mocheso o tlaase.
2. Ho boloka sampole e sa nepahalang kapa nako e feteletseng ea ho boloka sampole.
Keletso: Boloka lisampole ho -80 °C kapa u hatsele ka har'a metsi a naetrojene 'me u qobe tšebeliso ea khafetsa ea leqhoa;leka ho sebelisa lisele tse ncha kapa lisele tsa setso bakeng sa ho ntša RNA.
3. Sample e sa lekaneng ea lysis.
Keletso: Ha lesela le kopanya homogenizing, etsa bonnete ba hore lisele li homogenized ka ho lekaneng le hore lisele tsa 'mele li arohane ka ho lekaneng ho hlalosa ho lokolloa ha RNA.
4. Theluent ha e eketsoe ka nepo.
Keletso: Netefatsa hore RNase-Free ddH2O e kenyelletsoa ka tsela e theohang bohareng ba lera la ho hloekisa.
5. Bolumo bo nepahetseng ba absolute ethanol ha boa eketsoa ho Buffer RL2 kapa Buffer RW2.
Keletso: Latela litaelo, eketsa molumo o nepahetseng oa absolute ethanol ho Buffer RL2 le Buffer RW2 'me u kopanye hantle pele u sebelisa khiti.
6. Tekanyetso ea sampole ea lisele ha ea lokela.
Keletso: Sebelisa 10-20 mg ea lisele kapa (1-5) × 106lisele ka 500 μl buffer RL1, kaha tšebeliso e feteletseng ea lisele e ka fella ka ho fokotsoa ha RNA.
7. Molumo o sa nepahalang oa ho hlakisa kapa tlhahiso e sa fellang.
Keletso: Bophahamo ba molumo oa kholomo ea tlhoekiso ke 50-200 μl;haeba phello ea elution e sa khotsofatse, ho khothaletsoa ho eketsa nako ea ho beha mocheso oa kamore ka mor'a ho eketsa RNase-Free ddH2O, mohlala bakeng sa 5-10 min.
8.Kolumo ea tlhoekiso e na le masalla a ethanol ka mor'a hore Buffer RW2 e hlatsoe.
Keletso: Haeba ho na le masala a ethanol ka mor'a ho hlatsoa ha Buffer RW2, tube e se nang letho ea centrifugation bakeng sa 1min, nako ea ts'ebetso ea "tube centrifugation" e se nang letho e ka eketsoa ho 2min, kapa mohala oa tlhoekiso o ka behoa mocheso oa motsoako bakeng sa metsotso e 5 ho tlosa ethanol e setseng ka ho lekaneng.
RNA e hloekisitsoeng e senyehile
Boleng ba RNA e hloekisitsoeng bo amana le lintlha tse kang ho boloka sampole, tšilafalo ea RNase, le ho qhekella, joalo-joalo.
1. Mehlala ea lithane ha e bolokoe ka nako.
Keletso: Haeba lisampole tsa linama kapa lisele li sa sebelisoe ka nako ka mor'a ho bokelloa, hang-hang cryopreserve ho -80 °C kapa naetrojene e metsi.Ho ntša RNA, sebelisa lisele tse sa tsoa nkuoa ha ho khoneha.
2. Ho qhibiliha ka makhetlo-khetlo ha lisampole tsa linama.
Keletso: Ha u boloka lisampole tsa linama, ho molemo ho li khaola likotoana tse nyane bakeng sa ho bolokoa, 'me u tlose e' ngoe ea likotoana ha u li sebelisa ho qoba ho qhibiliha khafetsa ha sampuli le ho senyeha ha RNA.
3. RNase e hlahisoa kapa e sa roala liatlana tse lahloang, limaske, joalo-joalo nakong ea ts'ebetso.
Keletso: Liteko tsa ho ntša RNA li etsoa hantle ka ho fetisisa likamoreng tse arohaneng tsa RNA 'me tafole e hlakoloa pele ho teko.
Apara liatlana le limaske tse lahloang nakong ea liteko ho fokotsa ho senyeha ha RNA ho bakoang ke ho hlahisoa ha RNase.
4. Li-reagents li silafalitsoe ke RNase nakong ea tšebeliso.
Keletso: Kenya sebaka ka Animal Total RNA Isolation Kit bakeng sa liteko tse amanang.
5. Li-tubes tsa centrifuge, malebela, joalo-joalo tse sebelisitsoeng ho fetola RNA li silafalitsoe ke RNase.
Keletso: Netefatsa hore liphaephe tsa centrifuge, malebela, lipeipi, joalo-joalo tse sebelisoang ho RNA ha li na RNase kaofela.
E hloekisitsoeng e fumanoeng RNA e ama liteko tse tlase
RNA e hloekisitsoeng ke kholomo ea tlhoekiso, haeba li-ion tsa letsoai, liprotheine li le ngata haholo li tla ama liteko tse tlase, tse kang: reverse transcription,Northern Blot et al.
1. The elutioned RNA e na le masalla a ione ea letsoai.
Keletso: Netefatsa hore molumo o nepahetseng oa ethanol o kentsoe Buffer RW2 le ho etsa litšepe tse 2 tsa tlhoekiso ka lebelo la centrifugal le bontšitsoeng bakeng sa ts'ebetso;haeba ho na le masala leha e le afe a ion ea letsoai, tlohela kholomo ea tlhoekiso ho Buffer RW2 bakeng sa 5 min mocheso oa kamore 'me u etse centrifugation ho eketsa ho tlosoa ha letsoai.
2. Masala a Ethanol ho RNA e hlahisitsoeng.
Keletso: Etsa bonnete ba hore ka mor'a ho hlatsoa li-buffer RW2, etsa ts'ebetso e se nang letho ea tube centrifugation ka lebelo la centrifugation le bontšitsoeng bakeng sa ts'ebetso, eketsa nako ea ts'ebetso e se nang letho ea tube centrifugation ho 2 min haeba ho ntse ho e-na le masala a ethanol, kapa ue tlohele mocheso oa kamore bakeng sa 5 m.
