Na u ntse u sebelisa Trizol ho ntša RNA?
Oho, se ntumelle ho tšoenyeha ka bophelo ba hau!
Trizol e haufi le ho qheleloa ka thoko, u se ke ua mpolella hore u ntse u le lefifing?

Karolo e ka sehloohong ea "Trizol reagent" ke phenol, 'me li-reagents tsa tlhaho tse kang chloroform le tsona li kenngoa ts'ebetsong ea liteko.Ho pepeseha ha nako e telele ho tla baka kotsi bophelong ba hau, haholo-holo ho kopana le letlalo ka ho toba ho ka baka ho chesoa ha lik'hemik'hale tse matla le maqeba a sa feleng.

Tlas'a maemo a tloaelehileng, balekane ba laboratori ba ka fokotsa likotsi feela ka ho itlhomela ka botlalo (ho roala lijase tsa lab, liatlana le limaske).

'Me keletso ea ka ho uena ke hore: ka kopo tlosa Trizol ka ho toba ho qoba kotsi e tsoang mohloling.

1. Sehlahisoa sa pele sa tlhahiso ea RNA
E tsoa ka 1987 (li-reagents tsa Trizol)

molemo:
Ho ntša ka botlalo

Mefokolo:
Li-reagents tse chefo tse kang guanidine isothiocyanate-phenol-chloroform lia hlokahala;
Opereishene e thata;
U hloka ho sebelisa DNase ho tlosa tšilafalo ea DNA

2.Sehlahisoa sa bobeli sa moloko oa RNA
Tsoa ka 1994 (QIAGEN RNeasy le lihlahisoa tse ngata tsa lapeng)

molemo:
Mokhoa oa li-column centrifugal o amoheloa, o leng bonolo ho o sebetsa;

Bothata:
Hoa hlokahala ho centrifuge ho tlosa litšila
U hloka ho sebelisa DNase ho tlosa tšilafalo ea DNA

3.Sehlahisoa sa moloko oa boraro sa tlhahiso ea RNA
E hlahile ka 2005 (QIAGEN RNeasy Plus le ForegeneLihlahisoa tsa letoto la tlhoekiso ea RNA)

molemo:
Sebelisa ka ho toba kholomo ea ho tlosa DNA ho tlosa DNA le litšila tsa lisele ka nako e le 'ngoe, ho boloka nako le boiteko;
E bolokehile ebile e bonolo, ha ho na tlhoko ea ho eketsa sefahla le DNase ho tlosa litšila habonolo le ho qoba tšoaetso ea DNA.

Ha re shebeng liphapang tsa ts'ebetso lipakeng tsa sehlahisoa sa moloko oa pele (Trizol), sehlahisoa sa moloko oa bobeli (RNeasy) le sehlahisoa sa moloko oa boraro (Forgene) sa tlhahiso ea RNA:

Ts'ebetso ea setšoantšo e hlakile: sehlahisoa sa moloko oa boraro se na le melemo e totobetseng

Mantsoe a mararo feela a ho hlalosa: bonolo!Ka potlako!Polokeho

Chate ea PK ea liphetho tsa litekobakeng satsa moloko oa pele, oa bobeli le oa boraro oa lihlahisoa tsa RNA:

1. Electrophoretogram

Moloko oa pele (1: Trizol)
Moloko oa bobeli (2:QIAGEN RNeasy)
Moloko oa boraro (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foregene)

Ke mofuta ofe oa sehlahisoa se setle, u tla tseba ka ho bapisa
RNA e ntšitsoeng ho sebelisoa lisebelisoa tsa Foregene
Eseng feela ho tsepamisa mohopolo haholo empa hape le botšepehi bo botle

Kerafo ea 2.qPCR (kerafo e holisang curve)

Moloko oa pele (Trizol)

Moloko oa bobeli (boputsoa ba leholimobolelaQIAGEN RNeasy-, khubelubolelaQIAGEN RNeasy +)

Moloko oa boraro (boputsoa bo bolela Foregene, botala bo bolela QIAGEN RNeasy plus)

(Tlhokomeliso: Moloko oa bobeli oa QIAGEN RNeasy oa qPCR graph e bolela hore kit ha e kenye DNase ebile ha e tlose tšilafalo ea DNA. Ka hona, CT e phahame 'me sephetho ha se nepahale; QIAGEN RNeasy + e bolela hore DNase e kentsoe 'me tšilafalo ea DNA e tlositsoe,' me sephetho se nepahetse)

Hore na ke electrophoretogram kapa quantitative PCR amplification curve graph, boleng ba lihlahisoa tsa Foregene ha bo tlase ho lihlahisoa tse tsoang kantle ho naha.