Ho lahleheloa ke kutlo (HL) ke lefu le atileng haholo la bokooa ba kutlo ho batho.Linaheng tse tsoetseng pele, hoo e ka bang 80% ea batho ba sa utloeng litsebeng ka puo ea pele baneng ba bakoa ke liphatsa tsa lefutso.Tse tloaelehileng ka ho fetisisa ke liphatsa tsa lefutso tse le 'ngoe (joalokaha ho bontšitsoe setšoantšong sa 1), liphetoho tsa liphatsa tsa lefutso tsa 124 li fumanoe li amahanngoa le tahlehelo ea kutlo e sa utloahaleng ho batho, tse ling kaofela li bakoa ke maemo a tikoloho.Ho kenngoa ha cochlear (sesebelisoa sa elektronike se behiloeng karolong e ka hare ea tsebe e fanang ka ts'usumetso ea motlakase ka ho toba ho methapo ea kutlo) ke khetho e atlehang ka ho fetisisa bakeng sa ho phekola HL e matla, ha sesebelisoa sa ho utloa (sesebelisoa sa elektronike se ka ntle se fetolang le ho matlafatsa maqhubu a molumo) se ka thusa Bakuli ba nang le HL e itekanetseng.Leha ho le joalo, hajoale ha ho na litlhare tse teng ho phekola lefutso la HL (GHL).Lilemong tsa morao tjena, phekolo ea liphatsa tsa lefutso e fumane tlhokomelo e ntseng e eketseha e le mokhoa o tšepisang oa ho phekola ho se sebetse hantle ha tsebe ea ka hare.

Setšoantšo sa1.Kabo ea mefuta e fapaneng e amanang le ho hloka kutlo.[1]

Haufinyane tjena, bo-rasaense ba Setsi sa Salk le Univesithi ea Sheffield ba phatlalalitse sephetho sa lipatlisiso ho Molecular Therapy - Methods & Clinical Development [2], e bonts'itseng menyetla e pharaletseng ea ts'ebeliso ea kalafo ea lefutso ea lefutso.Uri Manor, motlatsi oa moprofesa oa lipatlisiso Setsing sa Salk le motsamaisi oa Setsi sa Waitt bakeng sa Advanced Biophotonics, o re o hlahile a e-na le tahlehelo e matla ea kutlo mme o ikutloa hore ho khutlisetsa kutlo e tla ba mpho e babatsehang.Patlisiso ea hae ea pejana e fumane hore Eps8 ke protheine ea taolo ea actin e nang le mesebetsi e tlamang le ea ho koala;ka liseleng tsa moriri oa cochlear, protheine e rarahaneng e entsoeng ke Eps8 e nang le MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 le GNAI3 haholo-holo e teng ka ho fetisisa Malebela a nako e telele a stereocilia, ao hammoho le MYO15A localize BAIAP2L2 ho malebela a shorter stereocilia, a hlokeha bakeng sa tlhokomelo ea moriri oa moriri.Ka hona, Eps8 e ka laola bolelele ba stereocilia ea lisele tsa moriri, e leng ea bohlokoa bakeng sa mosebetsi o tloaelehileng oa kutlo;Ho hlakoloa kapa ho fetoha ha Eps8 ho tla lebisa ho stereocilia e khuts'oane, e etsang hore e se khone ho fetolela molumo hantle hore e be mats'oao a motlakase bakeng sa temoho ea boko, e leng se lebisang ho se utloeng litsebeng..Ka nako e ts'oanang, mosebeletsi Walter Marcotti, moprofesa Univesithing ea Sheffield, o fumane hore lisele tsa moriri li ke ke tsa hōla ka mokhoa o tloaelehileng ha Eps8 e le sieo.Thutong ena, Manor le Marcotti ba ile ba kopana ho batlisisa hore na ho eketsa Eps8 liseleng tsa stereociliary ho ka tsosolosa ts'ebetso ea bona, hape, ho ntlafatsa kutlo ho litoeba.Sehlopha sa lipatlisiso se sebelisitse vector ea adeno-associated virus (AAV) Anc80L65 ho fana ka tatellano ea likhoutu e nang le mofuta o hlaha oa EPS8 ho cochlea ea Eps8-/- litoeba tse sa tsoa tsoaloa tsa P1-P2 ka ente ea membrane ea fensetere e chitja;ka liseleng tsa moriri oa cochlear ea mouse Mosebetsi oa stereocilia o ile oa lokisoa pele o hōla;'me phello ea ho lokisa e ne e khetholloa ke theknoloji ea litšoantšo le tekanyo ea stereocilia.Liphetho li bonts'itse hore Eps8 e ekelitse bolelele ba stereocilia le ts'ebetso e tsosolositsoeng ea lisele tsa moriri liseleng tsa maqhubu a tlase.Ba ile ba boela ba fumana hore, ha nako e ntse e ea, lisele li ne li bonahala li lahleheloa ke matla a tsona a ho pholosoa ke phekolo ena ea lefutso.Se boleloang ke hore phekolo ena e ka 'na ea hloka ho tsamaisoa ka popelong, kaha lisele tsa moriri tsa Eps8-/- li ka' na tsa se li holile kapa li bokelletse tšenyo e ke keng ea lokisoa ka mor'a hore litoeba li hlahe."Eps8 ke protheine e nang le mesebetsi e mengata e fapaneng, 'me ho ntse ho e-na le lintho tse ngata tseo u lokelang ho li hlahloba," ho boletse Manor.Lipatlisiso tsa nako e tlang li tla kenyelletsa ho batlisisa phello ea phekolo ea liphatsa tsa lefutso ea Eps8 ho tsosolosa kutlo ka mekhahlelo e fapaneng ea tsoelo-pele, le hore na ho ka khoneha ho lelefatsa menyetla ea phekolo.Ka tshohanyetso, ka Pulungoana 2020, Moprofesa KarenB Avraham oa Univesithi ea Tel Aviv naheng ea Israel o ile a phatlalatsa liphetho tsa hae koranteng ea EMBO Molecular Medicine [3], a sebelisa theknoloji e ncha ea phekolo ea lefutso ho theha kokoana-hloko e se nang kotsi e amanang le adeno AAV9-PHP.B, Bothata ba liphatsa tsa lefutso liseleng tsa moriri oa Syne4-/- litoeba bo ile ba lokisoa ka ho kenya kokoana-hloko e jereng tatellano ea li-coding ea Syne4 ka har'a tsebe e ka hare ea litoeba, e lumella hore e kene liseleng tsa moriri 'me e lokolle liphatsa tsa lefutso tse nkiloeng, tse ba lumellang hore ba hōle le ho sebetsa ka mokhoa o tloaelehileng (joaloka setšoantšong sa 2).

Setšoantšo sa2.Setšoantšo sa schematic sa anatomy ea tsebe e ka hare, e tsepamisitseng maikutlo ho setho sa Corti le ts'ebetso ea cellular ea nesprin-4.

Ho ka bonoa hore tšebeliso ea phekolo ea liphatsa tsa lefutso ho finyella morero oa ho phekola mafu a lefutso boemong ba liphatsa tsa lefutso ka ho kenya, ho tlosa kapa ho lokisa liphatsa leha e le life tse fetotsoeng bakeng sa phekolo (ke hore, ho laola liphetoho tsa lefutso ho lefu lena) ho na le phello e phahameng ea kliniki.litebello tsa kopo.Mekhoa ea hajoale ea kalafo ea liphatsa tsa lefutso bakeng sa ho se utloe litsebeng ha liphatsa tsa lefutso e ka aroloa ka mekhahlelo e latelang:

phetoho ea liphatsa tsa lefutso

Phetoho ea liphatsa tsa lefutso ha ho pelaelo hore ke mofuta o "otlolohileng" oa phekolo ea lefutso, o ipapisitseng le ho khetholla le ho nkela gene e nang le bokooa sebaka ka mofuta o tloaelehileng kapa o hlaha oa lefutso.Thuto ea pele e atlehileng ea phekolo ea liphatsa tsa lefutso tsa tsebe ea ka hare bakeng sa tahlehelo ea kutlo e bakoang ke ho tlosoa ha vesicular glutamate transporter 3 (VGLUT3) gene;Ho fana ka maikutlo a AAV1-exogenous VGLUT3 ka har'a lisele tsa moriri oa tsebe ea ka hare (IHCs) e ka fella ka ho hlaphoheloa hoa kutlo, ho hlaphoheloa ha karolo ea "ribbon synaptic morphology", le likarabo tse ferekanyang [4].Leha ho le joalo, mehlaleng e kenyeletsang mefuta e 'meli ea liphatsa tsa lefutso e fanoeng ke AAV e hlalositsoeng selelekeleng se ka holimo, ke habohlokoa ho hlokomela hore mehlala ea mouse e sebelisetsoang mefuta e itseng ea lefutso la lefutso la lefutso la tahlehelo ea kutlo ea lefutso e fapane ka nakoana le batho, 'me ho litoeba tsa P1, tsebe e ka hare e boemong ba tsoelo-pele.Ho fapana le hoo, batho ba tsoetsoe ba e-na le tsebe e ka hare e hōlileng tsebong.Phapang ena e thibela ts'ebeliso e ka bang teng ea sephetho sa toeba kalafong ea mafu a lefutso a lefutso ntle le haeba kalafo ea lefutso e isoa litsebeng tse holileng tsa litoeba.

Ho hlophisa liphatsa tsa lefutso: CRISPR/Cas9

Ha ho bapisoa le "phetoho ea liphatsa tsa lefutso", nts'etsopele ea theknoloji ea ho fetola liphatsa tsa lefutso e tlisitse tšimoloho ea ho phekola mafu a lefutso ho tloha motsong.Habohlokoa, mokhoa oa ho fetola liphatsa tsa lefutso o etsa hore ho be le mefokolo ea mekhoa ea phekolo ea liphatsa tsa lefutso e feteletseng e sa lokelang bakeng sa mafu a sa utloeng litsebeng a lefutso, le bothata ba hore mokhoa oa overexpression ha o tšoarelle nako e telele.Ka mor'a hore bafuputsi ba Machaena ba kokote ka ho khetheha Myo6C442Y mutant allele ka litoeba tsa Myo6WT/C442Y ba sebelisa AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2 tsamaiso ea liphatsa tsa lefutso, 'me ka mor'a likhoeli tsa 5 ho kokota, litoeba Mosebetsi oa kutlo oa mohlala o ile oa tsosolosoa;Ka nako e ts'oanang, ho ile ha boela ha hlokomeloa hore tekanyo ea ho pholoha ha lisele tsa moriri ka har'a tsebe e ka hare e ile ea ntlafatsoa, ​​sebōpeho sa cilia se ile sa fetoha kamehla, 'me matšoao a electrophysiological a lokisoa [5].Ena ke thuto ea pele lefats'eng ho sebelisa theknoloji ea CRISPR/Cas9 bakeng sa phekolo ea lefulo la lefutso le bakoang ke phetoho ea liphatsa tsa lefutso tsa Myo6, 'me ke tsoelo-pele ea bohlokoa ea lipatlisiso tsa theknoloji ea ho fetola liphatsa tsa lefutso bakeng sa phekolo ea lefulo le futsitsoeng.Phetolelo ea bongaka ea phekolo e fana ka motheo o tiileng oa saense.

Mekhoa ea phepelo ea liphatsa tsa lefutso

E le hore phekolo ea liphatsa tsa lefutso e atlehe, limolek'hule tsa DNA tse hlobotseng li ke ke tsa phunyeletsa lisele ka katleho ka lebaka la hydrophilicity ea tsona le tefiso e mpe ea lihlopha tsa phosphate, le ho netefatsa botšepehi ba limolek'hule tsa nucleic acid tse tlatselitsoeng, mokhoa o sireletsehileng le o sebetsang o tlameha ho khethoa.DNA e tlatselitsoeng e fetisetsoa ho sele e lebisitsoeng kapa lisele.AAV e sebelisoa haholo joalo ka koloi ea phano bakeng sa kalafo ea mafu ka lebaka la ts'oaetso e phahameng ea tšoaetso, immunogenicity e tlase, le tropism e pharaletseng ho mefuta e fapaneng ea lisele.Hajoale, sehlopha se seholo sa mosebetsi oa lipatlisiso se fumane hore na ho na le tropism ea mefuta e fapaneng ea AAV e amanang le mefuta e fapaneng ea lisele tse ho cochlea ea toeba.Ho sebelisa litšoaneleho tsa ho fana ka AAV hammoho le bahlahisi ba khethehileng ba lisele ho ka finyella polelo e tobileng ea lisele, e ka fokotsang liphello tse sa lebelloang.Ho phaella moo, e le mokhoa o mong oa li-vector tsa AAV tsa setso, li-vector tse ncha tsa maiketsetso tsa AAV li lula li ntse li ntlafatsoa 'me li bontša bokhoni bo phahameng ba ho fetisetsa tsebe karolong e ka hare ea tsebe, eo AAV2/Anc80L65 e sebelisoang ka ho fetisisa.Mekhoa ea phepelo e se nang kokoana-hloko e ka aroloa hape ka mekhoa ea 'mele (microinjection le electroporation) le mekhoa ea lik'hemik'hale (lipid-based, polymer-based, le nanoparticles ea khauta).Mekhoa ena ka bobeli e 'nile ea sebelisoa ho phekola mafu a lefutso a lefutso 'me e bontšitse melemo le mefokolo e fapaneng.Ntle le koloi ea phano bakeng sa kalafo ea liphatsa tsa lefutso joalo ka koloi, mekhoa e fapaneng ea tsamaiso ea liphatsa tsa lefutso ea vivo e ka sebelisoa ho ipapisitse le mefuta e fapaneng ea lisele tse shebiloeng, litsela tsa tsamaiso, le katleho ea kalafo.Sebopeho se rarahaneng sa tsebe e ka hare se etsa hore ho be thata ho fihla liseleng tse lebisitsoeng 'me kabo ea lisebelisoa tsa ho fetola genome e lieha.The membranous labyrinth e ka har'a lesapo la lesapo la temporal 'me e kenyelletsa lesela la cochlear, semicircular duct, utricle le balune.Karohano ea eona e lekanyelitsoeng, phallo e fokolang ea mali, le karohano ho tsoa maling ka thibelo ea mali e fokotsa phepelo e sebetsang ea kalafo ho litoeba tse sa tsoa tsoaloa.Ho fumana li-titer tsa kokoana-hloko tse loketseng phekolo ea liphatsa tsa lefutso, ente e tobileng ea libaka tsa likokoana-hloko ka har'a tsebe e ka hare ea hlokahala.Litsela tse thehiloeng tsa ente li kenyelletsa [6]: (1) lesela la fensetere le pota-potileng (RWM), (2) tracheostomy, (3) endolymphatic kapa perilymphatic cochleostomy, (4) lesela la fensetere le pota-potileng hammoho le Tube fenestration (CF) (joaloka setšoantšong sa 3).

Setšoantšo sa 3.Kalafo ea liphatsa tsa lefutso e ka hare ea tsebe.

Le hoja tsoelo-pele e mengata e entsoe ka phekolo ea liphatsa tsa lefutso, ho itšetlehile ka lipakane tsa phetolelo ea kliniki, mosebetsi o mongata o lokela ho etsoa pele phekolo ea liphatsa tsa lefutso e ka fetoha khetho ea pele ea phekolo bakeng sa bakuli ba nang le mafu a liphatsa tsa lefutso, haholo-holo ntlafatsong ea li-vector tse sireletsehileng le tse sebetsang hantle le mokhoa oa ho fana.Empa re lumela hore haufinyane, mefuta ena ea liphekolo e tla fetoha setsi sa kalafo ea motho ka mong mme e tla ba le phello e ntle haholo maphelong a batho ba nang le mathata a lefutso le malapa a bona.

Foregene e boetse e tsebahalitse lisebelisoa tse phahameng tsa tlhahlobo bakeng sa liphatsa tsa lefutso tse lebisitsoeng, tse potlakileng, 'me li ka etsa phetiso ea morao-rao le maikutlo a qPCR ntle le ho ntšoa ha RNA.

Lihokelo tsa Sehlahisoa

Cell Direct RT-qPCR kit—Taqman/SYBR GREEN I

Ho fumana lintlha tse ling ka sehlahisoa, ka kopo ikopanye le:

overseas@foregene.com