Mochini oa PCR| Na u hlile ua utloisisa?

Theknoloji ea PCR e hapileng Moputso oa Nobel

Ka 1993, rasaense oa Leamerika Mulis o ile a fumana Khau ea Nobel ea Chemistry, 'me katleho ea hae e bile ho qaptjoa ha theknoloji ea PCR.Boselamose ba theknoloji ea PCR bo maemong a latelang: Taba ea pele, palo ea DNA e lokelang ho holisoa e nyane haholo, 'me ha ho nahanoa hore molek'hule o le mong o ka sebelisoa bakeng sa ho holisa;ea bobeli, katleho ea ho holisa e phahame, 'me palo ea liphatsa tsa lefutso tse lebisitsoeng ke tsa exponential.Amplification, makhetlo a fetang limilione tse 10 ka lihora tse 'maloa.Hona joale sesebelisoa sa PCR se se se sebelisoa haholo lipatlisisong tsa saense ea bophelo le likarolo tse ling tse ngata.

Mefuta e fapaneng le baetsi ba libaesekele tse futhumatsang ba ka bonts'a ts'ebetso e fapaneng le ho pheta-pheta.Phapang ena ha e ame feela ts'ebetso ea PCR empa hape e ama ho nepahala le ho tsitsa ha data e fumanoeng.Ho utloisisa likarolo tsa mochini oa PCR ho ka re thusa ho holisa katleho ea liteko tsa rona.

Mojule oa ho futhumatsa

Ho nepahala ha mocheso oa sebaesekele sa mocheso ho ka ba qeto ea katleho kapa ho hloleha ha PCR.Ho tsitsa ha mocheso ho ea hantle sebakeng sa ho futhumatsa ho bohlokoa hape ho fumana liphetho tse tšepahalang le tse ka hlahisoang hape tsa PCR.

Mokhoa o mong oa ho etsa bonnete ba ho nepahala ha mocheso ke ho etsa liteko khafetsa ka ho sebelisa lisebelisoa tsa netefatso ea mocheso le ho lekanya bocha kamoo ho hlokahalang ke setsebi se koetlisitsoeng.Liteko tsa netefatso ea mocheso hangata li sebelisoa ho:

Ho nepahala ha hantle ho latela mocheso o behiloeng ka mokhoa oa isothermal

Ho nepahala ha hantle ho latela mocheso o behiloeng ka mor'a phetoho ea mocheso

Ho Nepaha ha Mocheso oa Sekoahelo sa Mocheso

Primer Annealing Taolo ea Mocheso

Taolo ea mocheso oa gradient ke ts'ebetso ea sesebelisoa sa PCR se thusang ntlafatso ea "primer annealing" ho PCR.Sepheo sa tlhophiso ea gradient ke ho fihlela lithempereichara tse fapaneng lipakeng tsa li-module, 'me ka ≥2°C ho phahama le ho theoha pakeng tsa kholomo e' ngoe le e 'ngoe, mocheso o fapaneng o ka lekoa ka nako e le ngoe ho fumana mocheso o nepahetseng oa ho qala.Ka khopolo, gradient ea 'nete e fihlella mocheso o lekanang pakeng tsa li-module.

Leha ho le joalo, libaesekele tse tloaelehileng tsa gradient thermal cyclers hangata li sebelisa sebaka se le seng sa mocheso le mocheso oa ho laola ka lintho tse peli tse futhumatsang le tse futhumatsang tse fumanehang lipheletsong ka bobeli, hangata li baka mefokolo e latelang:

Ho ka hlophisoa lithempereichara tse peli feela: mocheso o phahameng le o tlase bakeng sa annealing ea primer li behiloe lipheletsong tse peli tsa mochini oa mocheso, 'me maemo a nepahetseng a mocheso a mang a ke ke a finyelloa pakeng tsa modul.

Ka lebaka la phapanyetsano ea mocheso lipakeng tsa litšiea tse fapaneng, mocheso lipakeng tsa libaka tse fapaneng mojuleng o ka latela sekhahla sa sigmoidal ho fapana le gradient ea 'nete.

Mocheso oa mohlala

Bokhoni ba sebaesekele sa mocheso ho laola mocheso oa sampole bo bohlokoa haholo bakeng sa ho nepahala ha sephetho sa PCR.Litekanyetso tse ikhethileng tsa lisebelisoa joalo ka litheko, linako tsa ho ts'oara, le li-algorithms li bohlokoa bakeng sa ho lepa mocheso oa sampole.

Sekhahla sa ho futhumatsa le ho pholisa mochine oa PCR se bolela hore mocheso o fetoha pakeng tsa mehato ea PCR e etsahalang ka nako e itseng.Kaha ho nka nako e itseng hore mocheso o fetele ho tloha mojulung ho ea ho sampuli, tekanyo ea sebele ea ho futhumatsa le ho pholisa ea sampuli e tla lieha.Ka hona, tlhaloso ea lebelo la phetoho ea mocheso e hloka ho khetholloa le ho utloisisoa.

Sekhahla se phahameng kapa se phahameng sa mojule se emela phetoho e potlakileng ea mocheso eo module e ka e fihlelang ka nako e nyane haholo nakong ea ramp.

Sekhahla se tloaelehileng sa block ramp se emela sekhahla sa phetoho ea mocheso ka nako e telele 'me se tla fana ka tekanyo e emelang haholoanyane ea lebelo la mochine oa PCR.

Sekhahla se phahameng sa ho futhumatsa le ho pholisa sampole le tekanyo e tloaelehileng ea sampole ea ho futhumatsa le ho tsidifatsa li bonts'a mocheso oa 'nete o fumanoeng ke sampole.Sekhahla sa ho futhumatsa le ho pholisa sampole se tla fana ka papiso e nepahetseng haholoanyane ea ts'ebetso ea mochini oa PCR le tšusumetso e ka bang teng ho sephetho sa PCR.

Ha o etsa phetoho ea baesekele, ho khothaletsoa ho sebelisa sesebelisoa se nang le lenaneo la sekhahla sa ramp se etsisang mokhoa o fetileng bakeng sa phetisetso e bonolo le tšusumetso e fokolang ho phetisetso ea PCR.

Thermal cycler e lokela ho etsoa ho latela mehato ea nako feela ka mor'a hore sampuli e fihle ho mocheso o behiloeng.Ka tsela ena, nako eo sampuli e bolokiloeng ka eona mocheso o behiloeng e tla bolokoa ka mokhoa o nepahetseng haholoanyane le maemo a potoloho a tsamaisanang a hlokahalang ts'ebetsong ea ts'ebetso.

Hangata li-cyclers tsa Thermal li sebelisa mekhoa e rarahaneng ea lipalo ho etsa bonnete ba hore lisampole li ka fihla ka potlako mocheso o behiloeng ho latela lenaneo le behiloeng esale pele.Ho ipapisitsoe le boholo ba sistimi ea karabelo le botenya ba li-plastiki tsa PCR tse sebelisitsoeng, algorithm e ka bolela esale pele mocheso oa sampuli le nako eo e tla e nka ho fihlela mocheso o behiloeng.Ho itšetlehile ka li-algorithms tsena, nakong ea ho futhumatsa kapa ho pholile ha mochine oa mocheso oa mocheso, mocheso o thibelang hangata o tla feta boleng bo behiloeng ka mokhoa o bitsoang thermal block overshoot kapa undershoot.Setupo se joalo se etsa bonnete ba hore sampole e fihla mocheso o behiloeng kapele kamoo ho ka khonehang ntle le ho fetelletsa kapa ho itšehla thajana.

Sephetho sa liteko

Lintlha tse ka eketsang phallo ea sebaesekele se futhumatsang li kenyelletsa litefiso tsa marang-rang, tlhophiso ea li-block tsa mocheso, le ho kopanya li-platform tsa automation.

Sekhahla sa ho futhumatsa le ho pholisa ha sebaesekele se futhumatsang se emela lebelo leo ka lona le fihlang mocheso o behiloeng.Ha mocheso o phahama le ho oa ka potlako, PCR e tla matha ka potlako, e bolelang hore liteko tse ngata li ka phethoa ka nako e itseng.Ho feta moo, liteko li ka potlakisoa ka ho sebelisa DNA polymerase e potlakileng.

Moralo oa mojule oa libaesekele tse futhumatsang le ona o bohlokoa bakeng sa liteko tsa PCR.Ka mohlala, li-module tse ka nkeloang sebaka li lumella ho feto-fetoha ha palo ea lisampole ka ho matha.Ho feta moo, li-module tsa ho futhumatsa tse nang le li-module tse laoloang ka bomong li loketse ho tsamaisa mananeo a fapaneng a PCR ka nako e le 'ngoe ho sebaesekele se le seng sa mocheso.

Bakeng sa PCR e ikemetseng e phahameng, software e laolang tsamaiso ea liphaephe e lokela ho hlophiseha le ho lumellana.Sistimi ea othomathike e nepahetse bakeng sa ho etsa tšebetso e phahameng ea PCR hobane e ka sebetsoa khafetsa ka ho kenella ho fokolang ha motho, ka hona ho fokotsa nako e hlokahalang bakeng sa ho etsa liteko ka letsoho le ho eketsa palo ea liketso ka nako e itseng.

Ho tšepahala, ho tšoarella le ho netefatsa boleng ba li-Cyclers tsa Thermal

Ntle le ts'ebetso le bokhoni ba ho fetisa, mochine oa PCR o boetse o lokela ho khona ho mamella tšebeliso e itseng khafetsa, khatello ea tikoloho le maemo a ho tsamaisa thepa.Baetsi ba bang ba ka tlaleha ka moo sesebelisoa se etsang liteko tsa ho tšepahala le ho tšoarella.Ho fumana lisebelisoa tsa PCR ho kenyelletsa:

Ho tšepahala: Lisebelisoa tsa mechine li sebelisetsoa ho etsa liteko tse pheta-phetoang ho lisebelisoa tsa lisebelisoa tse sebelisoang khafetsa tse kang li-lids tsa mocheso, li-control panel / touchscreens, le li-module tsa ho palama libaesekele.

Khatello ea tikoloho: Likamore tsa tikoloho li ka sebelisoa ho etsisa maemo a fapaneng a liteko tse tloaelehileng, joalo ka mocheso, mongobo.

Teko ea ho Romella: Teko e matla le ho thothomela ho ka etsoa ho latela litekanyetso tsa Mokhatlo oa Machaba oa Tšireletso ea Tšireletso ho netefatsa hore sesebelisoa se ka fihla maemong a ts'ebetso a sa senyehang.

Tiisetso le tšebeletso bakeng sa ho hlokomela mochine oa PCR

Leha ho na le tlhahlobo e matla ea ho ts'epahala le ho tšoarella nako e telele, libaesekele tse futhumatsang li na le mathata a tekheniki bophelong ba sesebelisoa.Bakeng sa khotso ea kelello, tiisetso, tšebeletso le tlhokomelo ea moetsi li lokela ho nkoa ha ho reka sesebelisoa.

Ho feto-fetoha ha lits'ebeletso tse joalo ka tlhokomelo ea sebakeng sa marang-rang/ho khutlela fekthering, lits'ebeletso tsa ho beha leihlo hole, le lisebelisoa tse ncha ts'ebetsong ea tlhokomelo, joalo-joalo, ho fokotsa phello ea katleho ea mosebetsi.

Bolelele ba nako ea tiisetso, nako ea phetoho ea ts'ebeletso, ho fumaneha ha tšehetso ea tekheniki, le litsebo tsa basebetsi ba ts'ehetso ea litsebi.

Ho khonahala ho kenya lisebelisoa, ts'ebetso, tšebelisano 'moho le netefatso ho fihlela litlhoko tsa laboratori le tse amanang le taolo.Litšebeletso tsa tlhokomelo tse kang ho netefatsa mocheso, tlhahlobo, le ho lekanya li teng ho netefatsa hore sesebelisoa se sebetsa hantle le li-parameter tse tsamaellanang.

Lihlahisoa tse Amanang: