Sterilization ea malebela a pipette le li-tubes tsa EP, joalo-joalo.
1. Lokisetsa 0.1% (sekete sa sekete) DEPC (ntho e chefo e ngata) ka metsi a hloekisitsoeng, e sebelise ka hloko ka har'a mosi oa mosi, 'me ue boloke ho 4 ° C hole le leseli;
Metsi a DEPC ke metsi a hloekileng a phekoloang ka DEPC 'me a hloekisoa ka mocheso o phahameng le khatello e phahameng.E lekoa hore ha e na RNase, DNase le proteinase.
2. Beha ntlha ea pipette le EP tube ho 0.1% DEPC, 'me u netefatse hore ntlha ea pipette le EP tube e tletse 0.1% DEP.
3. Itšireletse khanyeng, u emise bosiu bo le bong (12-24h)
4. Lebokose le nang le ntlha le EP tube ha le hloke ho kenngoa ka DEPC.Kamora ho tlosa metsi a DEPC ntlheng kapa EP tube, e phuthe 'me u e phuthele.
5. likhato tse 121 tsa Celsius, 30min
6. 180 likhato tsa Celsius, omella lihora tse 'maloa (bonyane lihora tse 3)
Tlhokomeliso: a.Apara liatlana tsa latex le limaske ha u tšoara DEPC!b, kapa ntle le ho sterilization ea DEPC, 130 ℃, 90min autoclave (lilaboratori tse ngata tse phahameng tsa mocheso habeli)
Litlhaloso tsa tlhahiso ea RNA
Lintho tse peli tse kholo tsa ho hloleha ho itšehla thajana ho RNA
Ho senyeha ha RNA le masala a litšila liseleng,mabapi le ho senyeha, a re qaleng ho sheba hore na ke hobane’ng ha RNA e nkiloeng liseleng tse hōlisitsoeng e sa senyehe habonolo.Li-reagents tse teng tsa RNA kaofela li na le likarolo tse thibelang RNase ka potlako.Eketsa lysate ho lisele tse nang le setso, 'me u li kopanye feela, lisele tsohle li ka kopanngoa ka ho feletseng le lysate,' me lisele li qhibiliha ka ho feletseng.Ka mor'a hore lisele li be le lysed, metsoako e sebetsang ka har'a lysate hang-hang e thibela RNase ea intracellular, kahoo RNA e lula e tiile.Ke ho re, hobane lisele tsa setso li kopana habonolo le ka botlalo le lysate, RNA ea bona ha e fokotsehe habonolo;ka lehlakoreng le leng, RNA ea lisele e senyeha habonolo hobane lisele tse ka har'a lisele ha li bonolo ho kopana le lysate ka potlako.ka baka la ho kopana ho lekaneng.Kahoo,ho nka hore ho na le mokhoa oa ho fetola lisele hore e be sele e le 'ngoe ha ho ntse ho thibela mosebetsi oa RNA, bothata ba ho senyeha bo ka rarolloa ka ho feletseng.
Ho sila ka naetrojene ea metsi ke mokhoa o sebetsang ka ho fetisisa o joalo.Leha ho le joalo, mokhoa oa ho sila oa naetrojene oa metsi o thata haholo, haholo ha palo ea lisampole e le khōlō.Sena se ile sa hlahisa ntho e latelang e molemo ka ho fetisisa: homogenizer.Thehomogenizermokhoa ha o nahane ka potso ea hore na ts'ebetso ea RNase e thibeloa joang pele lisele li kopana le lysate, empa ho e-na le hoo e rapella hore sekhahla sa ho senyeha ha lisele se potlake ho feta tekanyo eo RNase ea intracellular e senya RN.
Phello ea homogenizer ea motlakase e betere,'me phello ea homogenizer ea khalase e futsanehile, empa ka kakaretso, mokhoa oa homogenizer o ke ke oa thibela ts'ebetso ea ho senyeha.Ka hona, haeba ho ntšoa ho senyeha, homogenizer ea pele ea motlakase e lokela ho sebelisoa bakeng sa ho sila ka naetrojene ea metsi;khalase ea homogenizer ea pele e lokela ho fetoloa ho homogenizer ea motlakase kapa e kenngoe ka ho toba ka naetrojene ea metsi.Bothata ke hoo e ka bang 100% e ka khonehang.fumana tharollo.
Bothata ba masala a litšila bo amang liteko tse latelang bo na le lisosa tse fapaneng ho feta ho senyeha, 'me litharollo li fapane ka tsela e tšoanang.Ha re phethela,haeba ho na le ho senyeha kapa litšila tse setseng ka har'a lisele, mokhoa oa ho ntša / reagent bakeng sa lisebelisoa tse khethehileng tsa liteko li tlameha ho ntlafatsoa.Ha ho hlokahale hore u sebelise lisampole tsa hau tsa bohlokoa bakeng sa ho ntlafatsa: u ka reka liphoofolo tse nyenyane tse kang tlhapi/khoho 'marakeng, u nke karolo e tsamaellanang le eona bakeng sa ho ntša RNA, le karolo e 'ngoe bakeng sa ho ntša protheine - sila ka molomo, mpa le mala.
Sepheo sa RNA ea RNA e ntšitsoeng e sebelisoa bakeng sa liteko tse fapaneng tsa ho latela, 'me litlhoko tsa eona tsa boleng li fapane
Kaho ea laebrari ea cDNA e hloka botšepehi ba RNA ntle le mesaletsa ea li-enzyme reaction inhibitors;Leboya le hloka botshepehi bo phahameng ba RNA le ditlhoko tse tlase bakeng sa masala a enzyme reaction inhibitors;RT-PCR ha e hloke botšepehi ba RNA bo phahameng haholo,empa e thibela tšebetso ea enzyme.Litlhoko tse setseng li thata.Kenyelletso e etsa qeto ea tlhahiso;nako le nako sepheo ke ho fumana bohloeki bo phahameng ka ho fetisisa ba RNA, e tla bitsa batho le chelete.
Pokello/Pokello ya Mehlala
Lintlha tse Amang Ho Senyeha Kamora hore sampole e tlohe 'meleng o phelang / kapa tikolohong ea kholo ea mantlha, li-enzyme tsa endogenous sampoleng li tla qala ho theola RNA,'me sekhahla sa ho senyeha se amana le litaba tsa li-enzyme le mocheso oa endogenous.Ka tloaelo, ho na le mekhoa e 'meli feela ea ho thibela ts'ebetso ea enzyme e sa feleng: eketsa lysate hang-hang le homogenize ka botlalo le ka potlako;khaola likotoana tse nyane 'me hang-hang u hatsele ka naetrojene ea metsi.Mekhoa ena ka bobeli e hloka ts'ebetso e potlakileng.Ea ho qetela e loketse lisampole tsohle, athe ea pele e loketse feela lisele tse nang le lisele tse tlase le li-enzyme tsa endogenous le ho bonolo ho homogenize.Haholo-holo, lisele tsa semela, sebete, thymus, manyeme, spleen, boko, mafura, mesifa ea mesifa, joalo-joalo li hoamisoa hantle ka naetrojene e metsi pele e tsoela pele.
Ho arohana le homogenization ea disampole
Lintlha tse Amang ho Fokotseha le Puno Karohano ea Mehlala kebakeng sa homogenization e phethahetseng, e leng bakeng sa tokollo e felletseng le e felletseng ea RNA.Lisele li ka homogenized ka ho toba ntle le ho robeha.Lithane li ka etsoa homogenized feela ka mor'a ho robeha.Tomoso le libaktheria li hloka ho rojoa ka li-enzyme pele li ka etsoa homogenized.Lithane tse nang le li-endogenous enzyme content le homogenization e bonolo li ka sithabetsoa le ho etsoa homogenized ka nako e le 'ngoe ho lysate ke homogenizer;lisele tsa semela, sebete, thymus, manyeme, spleen, boko, mafura, mesifa ea mesifa le lisampole tse ling, li na le li-enzyme tse ngata tsa tlhaho kapa ha li homogenized habonolo,kahoo tšitiso ea lisele le homogenization li tlameha ho etsoa ka thoko.Mokhoa o ka tšeptjoang le o behang haholo oa ho arohana ke ho sila ka naetrojene ea metsi, 'me mokhoa o tšepahalang ka ho fetisisa oa homogenization ke tšebeliso ea homogenizer ea motlakase.Taba e khethehileng mabapi le ho siloa ka naetrojene e metsi: sampole ha ea lokela ho qhibiliha nakong eohle ea ts'ebetso ea ho sila, kaha li-enzyme tsa endogen li na le monyetla oa ho sebetsa ha li hoamisitsoe.
Khetho ea lysate
E amang boiketlo ba ts'ebetso le lintlha tsa litšila tse setseng tsa endogenous Litharollo tse sebelisoang hangata tsa lysis li ka batla li thibela mosebetsi oa RNase.Ka hona, ntlha ea bohlokoa ea ho khetha tharollo ea lysis ke ho nahana ka ho kopana le mokhoa oa ho hloekisa.Ho na le mokhelo o le mong:disampole tse nang le dikahare tse phahameng tsa enzyme e khothalletsoang ho sebelisa lysate e nang le phenol ho eketsa bokhoni ba ho koala li-enzyme tse sa feleng.
Khetho ea mokhoa oa ho hloekisa
Lintlha tse amang litšila tse setseng tsa endogenous, lebelo la ho ntšoa Bakeng sa lisampole tse hloekileng tse kang lisele, liphetho tse khotsofatsang li ka fumanoa ka mokhoa ofe kapa ofe oa tlhoekiso o haufi.Empa bakeng sa lisampole tse ling tse ngata, haholo-holo tse nang le litšila tse ngata tse kang limela, sebete, libaktheria, joalo-joalo, ho bohlokoa ho khetha mokhoa o loketseng oa tlhoekiso.Mokhoa oa tlhoekiso oa centrifugal o na le lebelo le potlakileng la ho ntša 'me o ka tlosa litšila tse amang karabelo e latelang ea enzymatic ea RNA, empa e theko e boima(Foregene e ka fana ka lisebelisoa tse theko e tlase, tobetsa lintlha tse ling.Mona);ho sebelisa mekhoa ea tlhoekiso ea moruo le ea khale, joalo ka pula ea LiCl, le eona e ka fumana liphetho tse khotsofatsang, empa nako ea ts'ebetso e telele..
"Litaeo tse tharo le tlhokomelo e robeli" bakeng sa RNA Extraction
Taeo ea 1:Ho felisa ho silafala ha li-enzyme tse tsoang kantle ho naha.
Tlhokomeliso 1:Apara limaske le liatlana ka thata.
Tlhokomeliso 2:Li-tubes tsa centrifuge, lihlooho tsa malebela, lithupa tsa pipette, litanka tsa electrophoresis, le libenche tsa liteko tse amehang tekong li lokela ho lahloa ka ho feletseng.
Tlhokomeliso ea 3:Li-reagents/tharollo tse amehang tekong, haholo-holo metsi, li tlameha ho se be le RNase.
Taeo ea 2:Thibela tšebetso ea li-enzyme tsa endo native
Tlhokomeliso ea 4:Khetha mokhoa o nepahetseng oa homogenization.
Tlhokomeliso ea 5:Khetha lysate e loketseng.
Ntlha ea 6:Laola palo e qalang ea sampuli.
Taeo ea 3:Hlakisa sepheo sa hau sa ho ntša
Ntlha ea 7:Ha sistimi efe kapa efe ea lysate e atamela boholo ba sampole ea ho qala, sekhahla sa katleho ea ho ntšoa se theoha haholo.
Tlhokomeliso 8:Mokhoa o le mong feela oa moruo oa ho ntša RNA ka katleho ke katleho litekong tse latelang, eseng chai.
Mehloli e kaholimo ho 10 ea Tšilafalo ea RNase
1. Menoana ke mohloli oa pele oa li-enzyme tse tsoang kantle ho naha, kahoo liatlana li tlameha ho roaloa le ho nkeloa sebaka khafetsa.Ho feta moo, limaske le tsona li tlameha ho apesoa, hobane ho phefumoloha hape ke mohloli oa bohlokoa oa li-enzyme.Molemo o mong oa ho roala maske a liatlana ke ho sireletsa motho ea lekang liteko.
2. Litlhahiso tsa li-pipette, li-tubes tsa centrifuge, li-pipette - RNase e ke ke ea etsoa ka ho etsa sterilization feela, kahoo malebela a pipette le li-tubes tsa centrifuge li lokela ho phekoloa ka DEPC, esita le haeba li ngotsoe e le DEPC e tšoaroang.Ho molemo ho sebelisa pipette e nang le morero o khethehileng, ho e hlakola ka bolo ea k'hothone ea joala ea 75% pele e sebelisoa, haholo-holo molamu;ho phaella moo, etsa bonnete ba hore u se ke ua sebelisa sesepa sa hlooho.
3. Metsi/bafa e tlameha ho se be le tšilafalo ea RNase.
4. Bonyane tafole ea teko e lokela ho hlakoloa ka libolo tsa k'hothone ea joala ea 75%.
5.Endogenous RNase Li-tissue tsohle li na le li-enzyme tse sa feleng, kahoo ho qhoqhoa ka potlako ha lisele tse nang le naetrojene ea metsi ke tsela e molemo ka ho fetisisa ea ho fokotsa ho senyeha.Mokhoa oa ho boloka naetrojene ea mokelikeli / mokhoa oa ho sila ehlile ha o na tšitiso, empa ke eona feela tsela bakeng sa lisele tse nang le maemo a holimo a li-enzyme tsa tlhaho.
6. lisampole tsa RNA Lihlahisoa tsa RNA tse ntšoang li ka ba le mesaletsa ea tšilafalo ea RNase.
7. Ho ntšoa ha Plasmid Ho ntšoa ha Plasmid hangata ho sebelisa Rnase ho theola RNA, 'me Rnase e setseng e lokela ho siloa ka Proteinase K ebe e ntšoa ke PCI.
8. Polokelo ea RNA Le ha e ka bolokoa mochesong o tlase, ho latela palo ea RNase ho tla baka tšenyo ea RNA.Tharollo e molemo ka ho fetisisa bakeng sa ho boloka nako e telele ea RNA ke ho emisoa ha letsoai / joala, hobane joala bo thibela mesebetsi eohle ea enzymatic mocheso o tlaase.
9. Ha li-cations (Ca, Mg) li na le li-ion tsena, ho futhumatsa ka 80C bakeng sa metsotso ea 5 ho tla etsa hore RNA e arohane, kahoo haeba RNA e hloka ho futhumala, tharollo ea ho boloka e hloka ho ba le chelating agent (1mM Sodium Citrate, pH 6.4).
10. Li-enzyme tse sebelisitsoeng litekong tse latelang li ka 'na tsa silafatsoa ke RNase.
Litlhahiso tse 10 tsa ho Ntša RNA
1: Thibela tšebetso ea RNase kapele.Mehlala e hoamisoa ka potlako kamora ho bokelloa, 'me RNase ha e sebetse ka ts'ebetso e potlakileng nakong ea lysis.
2: Khetha mokhoa o nepahetseng oa ho ntša lisele tse nang le ribozyme e ngata, 'me lisele tsa adipose li molemo ho sebelisa mokhoa o nang le phenol.
3: Boleng ba ho bolela esale pele bo hloka Leboea, kaho ea laebrari ea cDNA e hloka botšepehi bo phahameng, 'me RT-PCR le RPA (Ribonuclease protection assay) ha li hloke botšepehi bo phahameng.RT-PCR e hloka bohloeki bo phahameng (masala a enzyme inhibitor).
4: Homogenization e phethahetseng ke senotlolo sa ho ntlafatsa chai le ho fokotsa ho senyeha.
5: Hlahloba botšepehi ba ho lemoha ha RNA electrophoresis, 28S: 18S = 2: 1 ke pontšo e feletseng, 1: 1 e boetse e amoheleha bakeng sa liteko tse ngata.
6: Ho tlosoa ha DNA bakeng sa RT-PCR, tlhahlobo ea lihlopha Ho molemo ho sebelisa Dnase I ho tlosa DNA.
7: Fokotsa tšilafalo ea li-enzyme tse tsoang kantle ho naha - li-enzyme li ke ke tsa romelloa ho tsoa kantle.
8: Ha u tsepamisa maikutlo a nucleic acid e tlaase, ho lokela ho eketsoa reagent ea co-precipitation.Empa ho thibela co-precipitant e nang le li-enzyme le tšilafalo ea DNA.
9: Qhala RNA ka botlalo, ha ho hlokahala, futhumatsa ho 65C metsotso e 5.
mokhoa o loketseng oa ho boloka
E ka bolokoa ho -20C ka nako e khuts'oane, le ho -80C nako e telele.Mohato oa pele oa ho ntlafatsa lihlahisoa tsa RNA ke ho hlokomela hore litaba tsa RNA tsa lisampole tse fapaneng li fapana haholo.Bongata bo phahameng (2-4ug/mg) joalo ka sebete, manyeme, pelo, bongata bo mahareng (0.05-2ug/mg) joalo ka boko, embryo, liphio, matšoafo, thymus, ovary, bongata bo tlase (<0.05ug/mg) mg) joalo ka senya, lesapo, mafura.
1: Lisele tsa Lyse ho lokolla RN - haeba RNA e sa lokolloe, lihlahisoa li tla fokotseha.Homogenization ea motlakase e sebetsa betere ho feta mekhoa e meng ea homogenization, empa hape e kanna ea hloka ho kopanngoa le mekhoa e meng, joalo ka metsi a nitrogen mashing, enzymatic tshilo (Lysozyme/Lyticase)
2: Ntlafatso ea mokhoa oa ho ntša.Mathata a maholo ka ho fetisisa ka mekhoa e thehiloeng ho phenol ke stratification e sa fellang le tahlehelo ea karolo ea RNA (matla a phahametseng a ke ke a tlosoa ka ho feletseng).stratification e sa phethahalang e bakoa ke nucleic acid le protheine e ngata, e ka rarolloang ka ho eketsa palo ea lysate e sebelisoang kapa ho fokotsa palo ea sampole.Mohato oa ho ntšoa ha chloroform o ile oa eketsoa liseleng tsa adipose.Tahlehelo ea RNA e ka fokotsoa ka ho pompa ka morao kapa ka ho tlosa lera la organic le lateloang ke centrifugation.Bothata bo boholo ka mekhoa e thehiloeng ho centrifugation ke sampole e feteletseng.
Litlhahiso tsa khale tsa ho ntša
1. Pheko ea phenol: Eketsa palo e lekanang ea 1: 1 Phenol / Chloroform 'me u kopanye ka matla bakeng sa metsotso ea 1-2.Centrifuge ka lebelo le phahameng bakeng sa metsotso e 2.Ka hloko tlosa supernatant (80-90%).Le ka mohla u se ke ua fihla karolong e bohareng.Molumo o lekanang oa tharollo ea karabelo o ka eketsoa ho Phenol/Chloroform le ho tlosoa ha supernatant.Li-supernatant tse peli li ka kopanngoa hammoho bakeng sa pula ea nucleic acid ho ntlafatsa chai.U se ke ua ba bonolo haholo ha u kopanya, 'me u se ke ua leka ho tlosa matla a phahametseng tlhaho.
2. Ho hlatsoa ka 70-80% ea ethanol: Nakong ea ho hlatsoa, nucleic acid e tlameha ho emisoa ho netefatsa hore letsoai le setseng le hlatsuoa.Ka nako e ts'oanang, hang ka mor'a ho tšela ethanol, centrifuge ka lebelo le phahameng ka metsotsoana e seng mekae, ebe u tlosa ethanol e setseng ka pipette.Qhala ka mor'a ho ema mocheso oa kamore bakeng sa metsotso e 5-10.
11. Ho ntšoa ha mekhatlo e khethehileng
1. Fibrous tissue: Senotlolo sa ho ntšoa ha RNA ho tloha lisele tse nang le fiber tse kang pelo / mesifa ea masapo ke ho senya ka ho feletseng lisele.Li-tissue tsena li na le letsoalo le tlase la lisele, kahoo palo ea RNA ka yuniti e le 'ngoe ea boima ba lisele e tlase,' me ho molemo ho sebelisa chelete e ngata ea ho qala kamoo ho ka khonehang.Etsa bonnete ba hore u sila lesela ka botlalo tlas'a maemo a leqhoa.
2. Lithane tse nang le protheine e ngata / mafura a mangata: boko / meroho ea mafura a mangata a phahame.Kamora ho ntšoa ha PCI, supernatant e na le li-floccules tse tšoeu.Motsoako o matla o tlameha ho ntšoa hape ka chloroform.
3. Likokoana-hloko tse nang le nucleic acid / ribozyme e ngata: spleen / thymus e na le nucleic acid e ngata le ribozyme content.Ho sila lisele tlas'a maemo a leqhoa a lateloang ke homogenization e potlakileng ho ka etsa hore li-ribozyme li sebetse.Leha ho le joalo, haeba lysate e le viscous haholo (ka lebaka la litaba tse phahameng tsa nucleic acid), ho tlosoa ha PCI ho ke ke ha khona ho stratify ka katleho;Ho eketsa lysate ho ka rarolla bothata bona.Lisebelisoa tse ngata tsa PCI li ka tlosa DNA e setseng.Haeba pula e tšoeu e hlaha hang ka mor'a ho eketsa joala, e bontša tšilafalo ea DNA.Ho ntšoa hape ka acidic PCI ka mor'a ho qhibiliha ho ka tlosa tšilafalo ea DNA.
4. Lithishu tsa semela: Lithishu tsa semela li rarahane ho feta tsa liphoofolo.Ka kakaretso, limela li siloa tlas'a maemo a metsi a naetrojene, kahoo ho senyeha ha RNA ka li-enzyme tse sa tloaelehang ha hoa tloaeleha.Haeba bothata ba ho senyeha bo sa rarolloe, bo batla bo bakoa ke litšila tse nang le sampuli.Litšila tse ka har'a limela tse ngata li tla lebisa ho mesaletsa, 'me lebaka la mesaletsa hangata ke hobane litšila tsena li na le lintho tse ling tse tšoanang le tsa RNA: oa phunya ebe kea phunya,' me u adsorb le ke adsorb.Litšobotsi tsena li etsa qeto ea hore ke li-enzyme inhibitors tse matla haholo.
Hajoale, li-reagents tsa tlhahiso ea RNA tsa khoebo li ka ikamahanya le hoo e batlang e le litho tsohle tsa liphoofolo tse nang le liphetoho tse nyane, empa ho na le li-reagents tse seng kae tsa khoebo tsa RNA tse ka loketseng lisele tse ngata tsa semela.Ka lehlohonolo, Foregene e ka fana ka e khethehilengsemela RNA extraction kits, re na leSemela Total RNA Isolation kit, Plant Total RNA Isolation kit Plus.Ea ho qetela e etselitsoe limela tse nang le polysaccharide e phahameng le polyphenol.Bakeng sa tlhahiso ea RNA, maikutlo a tsoang ho basebelisi ba lab a molemo haholo.
12. Phello ea mohlala oa leqhoa le ho qhibiliha Sampole e hatselitsoeng e ka ba kholoanyane, 'me e hloka ho khaoloa pele e sebelisoa bakeng sa ho ntša RNA.Mehlala e atisa ho qhibiliha (mohlomong ka mokhoa o sa fellang) nakong ea ho itšeha.Ho ka 'na ha hlokahala hore lisampole tse hatselitsoeng li lekanngoe pele ho ho ntšoa ha RNA, 'me ka sebele ho qhibiliha ho tla etsahala nakong ea ts'ebetso ena.Ka linako tse ling, ho qhibiliha ha sampuli ho boetse ho etsahala nakong ea ts'ebetso ea ho sila metsi a naetrojene;kapa sampole e hoamisitsoeng ka ho toba e ekeletsoa lysate ntle mokelikeli naetrojene siloa, 'me thawing tla sebele etsahala pele homogenization feletseng.Liteko li bontšitse hore lisele tse hoamisitsoeng li kotsing ea ho senyeha ha RNA nakong ea ho qhibiliha ho feta lisele tse ncha.Lebaka leo e ka 'nang eaba ke lona: Ts'ebetso ea ho qhibiliha ea leqhoa e sitisa lintho tse ka har'a sele, e leng ho nolofalletsang li-enzyme tsa 'mele hore li kopane le RNA.
13. Kahlolo ea boleng ba RNA Hangata, electrophoresis e sebelisetsoa ho ahlola botšepehi ba RNA, 'me A260 / A280 e sebelisetsoa ho ahlola bohloeki ba RNA.Ka khopolo, RNA e tsitsitseng e na le karo-karolelano ea 28S: 18S = 2.7: 1, 'me lintlha tse ngata li hatisa karo-karolelano ea 28S: 18S = 2: 1.'Nete ke hore hoo e ka bang ha ho RNA e nkiloeng ho lisampole tse ling ntle le lisele tse ka karolelano ea 2: 1 (sena se ile sa fumanoa ho sebelisoa Agilent Bioanalyzer).
Liphetho tsa electrophoresis tsa RNA li angoa ke lintlha tse ngata, ho kenyelletsa le sebopeho sa bobeli, maemo a electrophoresis, mojaro oa sampole, tekanyo ea ho tlala ka EB, joalo-joalo Sebelisa electrophoresis ea tlhaho ho lemoha RNA le ho sebelisa DNA Marker e le taolo.Haeba 28S ho 2kb le 18S ho 0.9kb e hlakile, le 28S: 18S > 1, botšepehi bo ka finyella litlhoko tsa liteko tse ngata tse latelang.
A260/A280 ke sesupo se bakileng pherekano e ngata.Pele ho tsohle, hoa hlokahala ho hlakisa moelelo oa mantlha oa letšoao lena la li-nucleic acid: RNA e hloekileng, A260/280 = hoo e ka bang 2.0.RNA e hloekileng ke 'sesosa' le A260/A280 = 2 ke 'phello'.Hona joale motho e mong le e mong o sebelisa A260/A280 e le 'sesosa', a nahana hore "haeba A260/A280 = 2, joale RNA e hloekile", seo ka tlhaho se lebisang pherekanong.
Haeba u thahasella, u ka eketsa reagent e nyenyane e atisang ho sebelisoa ha ho ntšoa, e kang phenol, guanidine isothiocyanate, PEG, joalo-joalo, ho sampuli ea hau ea RNA, ebe u lekanya karo-karolelano ea A260 / A280.'Nete ke hore li-reagents tse ngata tse sebelisetsoang ho ntša RNA, hammoho le litšila tse ngata tsa sampole, li monya ho pota A260 le A280, tse amang A260/A280.
Mokhoa o rutang ka ho fetesisa hajoale ke ho skena lisampole tsa RNA mofuteng oa 200-300 nm.Mokokotlo oa RNA e hloekileng e na le litšobotsi tse latelang: mokoloko o boreleli, A230 le A260 ke lintlha tse peli tsa ho fetola, A300 e haufi le 0, A260 / A280 = ho pota 2.0, le A260 / A230 = ho pota 2.0.Haeba data ea scan ninete e le sieo, karo-karolelano ea A260/A230 le eona e tlameha ho khethoa, kaha karo-karolelano ena e na le kutloelo-bohloko ho feta ha litšila tsohle tse amang tšebetso ea enzymatic.Ela hloko mefuta e mengata ea lisebelisoa (0.1-0.5 bakeng sa A260).
Ho na le liketsahalo tse ling tse peli tse molemo: karo-karolelano e tla ba ka tlase ho 0.3 ha A260 / A280 e lekanngoa metsing;ha karo-karolelano e lekantsoeng ho 10 mM EDTA e batla e phahame ka 0.2 ho feta e lekantsoeng ka 1 mM EDTA.
Lihlahisoa tse amanang:
China Plant Total RNA Isolation Kit Manufacturer le Supplier |Foregene (foreivd.com)
Letoto la ho itšehla thajana la RNA - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)
Nako ea poso: Jul-15-2022
