Mokhatlo o boloka mohopolo oa ts'ebetso ea "tsamaiso ea mahlale, boleng bo holimo le boleng bo botle, moreki ea phahameng oa China Manufacturer bakeng sa 2× Concentrated Premix for Unpurified Sample Real-Time Quantitative PCR Direct Multiplex Probe Qpcr Mix Plus U, Khoebo ea rona e ikemiselitse ho fa bareki lihlahisoa tsa bohlokoa le tse sireletsehileng tsa boleng bo holimo ka theko e 'ngoe le e 'ngoe ea bareki ka theko e tlase le e matla.
Mokhatlo o boloka mohopolo oa ts'ebetso "tsamaiso ea mahlale, boleng bo holimo le boleng bo holimo, moreki ea phahamengChina Taq DNA Polymerase le Qpcr, Khamphani ea rona e na le matla a mangata ebile e na le sistimi e tsitsitseng le e phethahetseng ea thekiso.Re lakatsa eka re ka theha likamano tse ntle tsa khoebo le bareki bohle ba tsoang hae le kantle ho naha motheong oa melemo e tšoanang.
Melao-motheo ea moralo oa nako ea 'nete ea PCR

Pele ho Primer le Reverse Primer

Bakeng sa nako ea 'nete ea PCR, moralo oa primer o bohlokoa haholo.Li-primers li amana le ho hlaka le katleho ea ntlafatso ea PCR, 'me li ka etsoa ho ipapisitsoe le melaoana e latelang:

• Bolelele ba pele: 18-30bp.
• Likahare tsa GC: 40-60%.
• Tm boleng: Software ea moralo oa Primer, joalo ka Primer 5, e ka fana ka boleng ba Tm ba primer.Litekanyetso tsa Tm tsa li-primers tse holimo le tse tlase li lokela ho ba haufi ka hohle kamoo ho ka khonehang.Mokhoa oa ho bala oa Tm o ka boela oa sebelisoa: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ha o etsa PCR, mocheso o ka tlase ho boleng ba pele ba Tm oa 5 ° C hangata o khethoa joalo ka mocheso o kenang (keketseho e lumellanang ea mocheso oa annealing e ka eketsa boits'oaro ba PCR).
• Li-Primers le lihlahisoa tsa PCR:

1. Bolelele ba sehlahisoa sa ntlafatso ea PCR ka ho khetheha ke 100-150bp.
2. Li-primer tsa moralo sebakeng sa bobeli sa sebopeho sa template li lokela ho qojoa ka hohle kamoo ho ka khonehang.
3. Qoba ho theha metheo e 2 kapa ho feta e tlatselletsanang lipakeng tsa 3′ ea lithako tse holimo le tse tlase.
4. Primer 3′ terminal base e ka se be teng ka tse ling tse 3 tse latellanang tsa G kapa C.
5. Li-primers ka botsona li ke ke tsa ba le meaho e tlatselletsang, ho seng joalo sebopeho sa hairpin se tla thehoa, se amang ntlafatso ea PCR.
6. ATCG e lokela ho ajoa ka ho lekana ka hohle kamoo ho ka khonehang ka tatellano ea pele, 'me setsi sa 3′ se lokela ho qojoa joalo ka T.

Sehlomathiso1:Cle DirectRT-qPCR Karolo ea Kitt tlatsetso pakete

1.Cell Lysis Tharollo

 Mokhatlo o boloka mohopolo oa ts'ebetso ea "tsamaiso ea mahlale, boleng bo holimo le boleng bo botle, moreki ea phahameng oa China Manufacturer bakeng sa 2× Concentrated Premix for Unpurified Sample Real-Time Quantitative PCR Direct Multiplex Probe Qpcr Mix Plus U, Khoebo ea rona e ikemiselitse ho fa bareki lihlahisoa tsa bohlokoa le tse sireletsehileng tsa boleng bo holimo ka theko e 'ngoe le e 'ngoe ea bareki ka theko e tlase le e matla.
China Manufacturer bakeng saChina Taq DNA Polymerase le Qpcr, Khamphani ea rona e na le matla a mangata ebile e na le sistimi e tsitsitseng le e phethahetseng ea thekiso.Re lakatsa eka re ka theha likamano tse ntle tsa khoebo le bareki bohle ba tsoang hae le kantle ho naha motheong oa melemo e tšoanang.

Melao-motheo ea moralo oa nako ea 'nete ea PCR

Pele ho Primer le Reverse Primer

Bakeng sa nako ea 'nete ea PCR, moralo oa primer o bohlokoa haholo.Li-primers li amana le ho hlaka le katleho ea ntlafatso ea PCR, 'me li ka etsoa ho ipapisitsoe le melaoana e latelang:

• Bolelele ba pele: 18-30bp.
• Likahare tsa GC: 40-60%.
• Tm boleng: Software ea moralo oa Primer, joalo ka Primer 5, e ka fana ka boleng ba Tm ba primer.Litekanyetso tsa Tm tsa li-primers tse holimo le tse tlase li lokela ho ba haufi ka hohle kamoo ho ka khonehang.Mokhoa oa ho bala oa Tm o ka boela oa sebelisoa: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ha o etsa PCR, mocheso o ka tlase ho boleng ba pele ba Tm oa 5 ° C hangata o khethoa joalo ka mocheso o kenang (keketseho e lumellanang ea mocheso oa annealing e ka eketsa boits'oaro ba PCR).
• Li-Primers le lihlahisoa tsa PCR:

1. Bolelele ba sehlahisoa sa ntlafatso ea PCR ka ho khetheha ke 100-150bp.
2. Li-primer tsa moralo sebakeng sa bobeli sa sebopeho sa template li lokela ho qojoa ka hohle kamoo ho ka khonehang.
3. Qoba ho theha metheo e 2 kapa ho feta e tlatselletsanang lipakeng tsa 3′ ea lithako tse holimo le tse tlase.
4. Primer 3′ terminal base e ka se be teng ka tse ling tse 3 tse latellanang tsa G kapa C.
5. Li-primers ka botsona li ke ke tsa ba le meaho e tlatselletsang, ho seng joalo sebopeho sa hairpin se tla thehoa, se amang ntlafatso ea PCR.
6. ATCG e lokela ho ajoa ka ho lekana ka hohle kamoo ho ka khonehang ka tatellano ea pele, 'me setsi sa 3′ se lokela ho qojoa joalo ka T.

Sehlomathiso1:Cle DirectRT-qPCR Karolo ea Kitt tlatsetso pakete

1.Cell Lysis Tharollo

Litaelo:

 Quick Easy Cell Direct RT-qPCR Kit-Taqman