Malebela a ho Ntlafatsa Pholiso ea Sekhomaretsi

1. Eketsa mojaro oa mohlala nakong ea electrophoresis.

2. Sebelisa buffer e sa tsoa lokisoa ea electrophoresis.

3. Ha u khaola sekhomaretsi, leka ho khaola sekhomaretsi feela ka lihlopha ho fokotsa molumo oa sekhomaretsi: u se ke ua hloka sekhomaretsi se nang le likhechana tse seng kae, ho seng joalo se tla ama lebelo la ho hlaphoheloa.

4. Ka mor'a hore u qhibilihe likotoana tse peli kapa ho feta tsa sekhomaretsi, sebelisa tube ho sa tsotellehe hore na molumo o moholo hakae 'me u e fetisetse kholumong e le' ngoe.

5. Tharollo e kentsoeng ka har'a sol e ka ba e nyenyane haholoanyane, e leng e loketseng haholoanyane ho tlamaha ha DNA ho lera, empa ka kakaretso ha e fete 750ul.

6. Senotlolo sa ho hlaphoheloa ha gel ke ho tlama DNA ho kholomo ka letsoai, acidity (tefiso) le hydrophobicity ea tharollo kholomong.Ka hona, haeba pH ea "electrophoresis buffer" e phahame haholo, 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) e ka kenyelletsoa ho sol;e le ho thibela limolek'hule tsa DNA ho lera, 30% isopropanol e ka ekeletsoa mocheso ka mokelikeli ka mor'a ho qhala sekhomaretsi.

7. Pele o eketsa leseli, tlohela kholomo ka mocheso oa kamore ka metsotso e seng mekae (hoo e ka bang metsotso e 10) ho etsa mouoane ka ho feletseng ethanol.

8. Qetellong, eketsa lintlha tse fokolang ho fokotsa molumo oa ho hlaphoheloa.Ka kakaretso, 30-50μl eluent e sebelisoa bakeng sa elution (eseng e nyenyane haholo, ho seng joalo e ke ke ea khona ho kolobisa lera, le sa khoneng ho hlahisa);marotholi a elution a bohareng ba lera, ho hlahisa ka botlalo DNA e tlameletsoeng lera.

9. Ka mor'a ho eketsa leseli, e ka hlajoa ka ho hlapa metsi ka likhato tse 55 ka metsotso e 5 kapa e kenngoa ka bateng ea metsi ea likhato tse 50 ka metsotso e fetang 10, kapa e tiisitsoe ka parafilm ka likhato tse 4 ka bosiu bo le bong, ebe e centrifuged bakeng sa ho hlaphoheloa letsatsing le hlahlamang, phello e ntle.

10.Eketsa centrifuged eluate khutlela kholomong ea adsorption le centrifuge hape.

Mekhoa e qaqileng le mekhoa ea ho hlaphoheloa ha sehlahisoa sa PCR

1. Tlhōlisano e tloaelehileng ea rabara

Haeba u batla ho khutlisa sekhomaretsi, ho molemo ho sebelisa kit, e loketseng ebile e na le sekhahla se phahameng sa ho hlaphoheloa.Haeba u hlile u hloka ho e khutlisa ka letsoho, u ka eketsa makhetlo a 3 molumo oa TE ka mor'a ho khaola sekhomaretsi.Ka mor'a ho qhibiliha ka bateng ea metsi, phenol, phenol / chloroform e ntšoa ka mokhoa o hloekileng, 'me ethanol e phalla.Ho felile ke lehlohonolo.

2. Ho hlaphoheloa ha DNA ho tloha li-gel tse tlaase tse qhibilihisang

Ho hloekisoa ha likaroloana tsa DNA Eketsa TE (10 mmol / l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol / l EDTA) e lekanang le molumo oa gel, 'me u behe sebakeng sa ho hlapa metsi ka 65 ° C metsotso e 5 ho qhala gel ka ho feletseng.

Ka mor'a hore e tlisoe mocheso oa kamore, palo e lekanang ea phenol (e tletseng TE, TE e tiisitsoe karolong e ka holimo, 'me karolo e ka tlaase ea phenol e tlosoa) e ile ea eketsoa, ​​​​'me motsoako o ne o kopantsoe ka bonolo (ha ho na ho kopanya ho hlokahalang),' me centrifuged ka 12,000 rpm bakeng sa metsotso ea 3.Pheta makhetlo a 1-2.

Nka matla a phahametseng tlhaho, eketsa molumo oa 0.1 oa 3mol/L sodium acetate (pH 5.2) le makhetlo a 2.5 a molumo oa ethanol e feletseng ho phethahatsa pula ea ethanol.Hlakola DNA e hloekisitsoeng ka tekanyo e loketseng ea TE, lekanya litaba, 'me u lokisetse tšebeliso (e ka sebelisoa bakeng sa tlhahlobo ea sebopeho sa liphatsa tsa lefutso, ho lokisetsa lipatlisiso, joalo-joalo).

3. Ho hlaphoheloa ha PCR ka mokhoa o nepahetseng oa amplification

Haeba ho hlaka ha PCR amplification e le ntle, ke tlhoekiso e bonolo feela le ho hlaphoheloa ha sehlahisoa sa PCR.U ka eketsa 50ug/ml proteinase K ho sehlahisoa sa PCR, likhato tse 37 bakeng sa 1h, u ntša hang ka phenol/chloroform, u ntše hang ka chloroform, 'me u kenye molumo oa 0.1 oa supernatant.Acetate ea sodium e ile ea fumanoa ke pula e nang le li-volumes tse 2.5 tsa ethanol e feletseng.

Lihlahisoa tse amanang:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/