Nako ea 'Nete PCR Easyᵀᴹ-Taqman
Tlhaloso ea Kit:
◮E bonolo-2 × PCR Mix ho fokotsa phoso ea liteko le nako ea ts'ebetso
◮Specific-optimized buffer le hot-start Taq enzyme e ka thibela ho holisoa ho sa hlakang le ho thehoa ha primer dimer.
◮Kutloelo-bohloko e phahameng - e khona ho bona likopi tse tlase tsa template
◮E sebetsa ka mokhoa o fapaneng - e tsamaellana le lisebelisoa tse ngata tsa nako ea nnete tsa PCR
Litlhaloso tsa Kit
2X Real PCR e bonoloTMMix-Taqman e fanoeng ke Real Time PCR EasyTM-Taqman kit ke sistimi e ncha ea premix e sebelisang li-probes tse khethehileng tsa fluorescent bakeng sa karabelo ea amplification ea Real Time PCR, e ka ntlafatsang haholo boleng ba sehlahisoa le kutloelo-bohloko ea karabelo.ROX e fanoa e le dae ea taolo ea kahare.
2X 'Nete ea PCR e BonoloTMMix-Taqman e na le Taq DNA Polymerase e ikhethang ea Foregene.Ha e bapisoa le li-enzyme tse tloaelehileng tsa Taq, e na le melemo ea matla a ho holisa haholo, bokhoni bo khethehileng ba ho holisa le sekhahla se tlase sa ho se lumellane.E ka fokotsa matlafatso e sa tobang le ho ntlafatsa ho nepahala ha PCR.
Litlhaloso
| Nako ea 'Nete PCR EasyTM- Taqman | ||||
| Sebopeho sa Kit (20μl system) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2×PCR ea 'neteBonoloTMKopanya- Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
| 20×ROX Reference Dae | 200 μl | 0.5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
| DNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
| Itaelo | 1 | 1 | 1 | 1 |
Likarolo le melemo
■ E bonolo—2X PCR Mix ho fokotsa phoso ea liteko le nako ea ts'ebetso
■ Specific-optimized buffer le hot-start Taq enzyme e ka thibela amplification e sa khetheheng le sebopeho sa primer dimer.
■ Kutlo e phahameng-e ka lemoha likopi tse tlase tsa template
■ Tšebeliso e ntle ea lintho tse ngata—e lumellana le lisebelisoa tse ngata tsa nako ea sebele tsa PCR
Sesebelisoa sa Kit
qPCR tlhahlobo
Phallo ea mosebetsi
Litšoantšo
Polokelo le shelf bophelo
Sekhahla sena se lokela ho bolokoa hole le khanya 'me se lokela ho bolokoa mochesong oa -20 ℃.Haeba e sebelisoa khafetsa, e ka boela ea bolokoa ho 4 ℃ ka nako e khutšoanyane (matsatsi a 10).
Ha ho mats'oao a amplification
1.Taq DNA Polymerase ka har'a kit e lahleheloa ke ts'ebetso ea eona ka lebaka la polokelo e sa lokelang kapa ho fela ha kit.
Keletso: Tiisa maemo a polokelo ea khiti;eketsa hape palo e loketseng ea Taq DNA Polymerase ho sistimi ea PCR kapa u reke Setsi sa PCR sa Nako ea 'Nete e ncha bakeng sa liteko tse amanang.
2.Ho na le li-inhibitors tse ngata tsa Taq DNA Polymerase ho template ea DNA.
Tlhahiso: Hloekisa thempleite hape kapa fokotsa boholo ba thempleite e sebelisitsoeng.
3.Mahloriso a Mg2 + ha a tšoanelehe.
Keletso: Motsoako oa Mg2+ oa 2× Real PCR Mix eo re fanang ka eona ke 3.5mM.Leha ho le joalo, bakeng sa li-primers le litempele tse khethehileng, khatello ea Mg2+ e ka ba holimo.Ka hona, o ka eketsa MgCl2 ka kotloloho ho ntlafatsa mahloriso a Mg2+.Ho kgothaletswa ho eketsa Mg2+ 0.5mM nako le nako bakeng sa ho ntlafatsa.
4.Maemo a amplification a PCR ha a tšoanelehe, 'me tatellano ea pele kapa mahloriso ha aa nepahala.
Tlhahiso: netefatsa ho nepahala ha tatellano ea pele 'me primer ha e so fokotsehe;haeba lets'oao la amplification le sa loka, leka ho theola mocheso o kenang 'me u lokise mahloriso a primer ka nepo.
5.Palo ea template e nyenyane haholo kapa e ngata haholo.
Keletso: Etsa tlhophiso ea template ea linearization gradient, 'me u khethe mohopolo oa template o nang le phello e ntle ka ho fetisisa ea PCR bakeng sa liteko tsa Real Time PCR.
NTC e na le boleng bo phahameng haholo ba fluorescence
Tšilafalo ea 1.Reagent e bakiloeng nakong ea ts'ebetso.
Keletso: Fetola ka lisebelisuoa tse ncha bakeng sa liteko tsa Real Time PCR.
2.Tshireletso e etsahetse nakong ea ho lokisoa ha mokhoa oa ho arabela oa PCR.
Keletso: Nka mehato e hlokahalang ea ts'ireletso nakong ea ts'ebetso, joalo ka: ho roala liatlana tsa latex, ho sebelisa ntlha ea pipette e nang le sefe, joalo-joalo.
3.Li-primers li senyehile, 'me ho senyeha ha li-primers ho tla etsa hore ho be le matla a sa khetheheng.
Tlhahiso: Sebelisa SDS-PAGE electrophoresis ho bona hore na li-primers li senyehile, 'me u li nkele sebaka ka li-primers tse ncha bakeng sa liteko tsa Real Time PCR.
Primer dimer kapa amplification e sa khetheheng
1.Mahloriso a Mg2 + ha a tšoanelehe.
Keletso: Motsoako oa Mg2 + oa 2 × Real PCR EasyTM Mix eo re fanang ka eona ke 3.5 mM.Leha ho le joalo, bakeng sa li-primers le litempele tse khethehileng, khatello ea Mg2+ e ka ba holimo.Ka hona, o ka eketsa MgCl2 ka kotloloho ho ntlafatsa mahloriso a Mg2+.Ho kgothaletswa ho eketsa Mg2+ 0.5mM nako le nako bakeng sa ho ntlafatsa.
2.The PCR annealing thempereichara e tlase haholo.
Tlhahiso: Eketsa mocheso oa PCR ka 1℃ kapa 2℃ nako le nako.
3.Sehlahisoa sa PCR se telele haholo.
Keletso: Bolelele ba sehlahisoa sa Real Time PCR bo lokela ho ba pakeng tsa 100-150bp, eseng ho feta 500bp.
4.Li-primers li senyeha, 'me ho senyeha ha li-primers ho tla lebisa ponahalong ea amplification e khethehileng.
Tlhahiso: Sebelisa SDS-PAGE electrophoresis ho bona hore na li-primers li senyehile, 'me u li nkele sebaka ka li-primers tse ncha bakeng sa liteko tsa Real Time PCR.
5.Sistimi ea PCR ha e ea nepahala, kapa sistimi e nyane haholo.
Tlhahiso: Sisteme ea karabelo ea PCR e nyane haholo e tla etsa hore ho nepahala ha ho lemoha ho fokotsehe.Ho molemo ho sebelisa mokhoa oa karabelo o khothaletsoang ke sesebediswa sa PCR ho etsa teko ea Real Time PCR hape.
Ho pheta-pheta ho fokolang ha boleng ba palo
1.Seletsa ha se sebetse hantle.
Tlhahiso: Ho ka 'na ha e-ba le liphoso pakeng tsa lesoba le leng le le leng la PCR la sesebelisoa, e leng se bakang ho se sebetse hantle nakong ea tsamaiso ea mocheso kapa ho lemoha.Ka kopo, hlahloba ho latela litaelo tsa sesebelisoa se tsamaisanang le sona.
2.Bohloeki ba mohlala ha bo botle.
Keletso: lisampole tse sa hloekang li tla lebisa ho se sebetseng hantle ha teko, ho kenyelletsang bohloeki ba thempleite le li-primers.Ho molemo ho hloekisa template, 'me li-primers li hloekisoa ka ho fetisisa ke SDS-PAGE.
3.Ho lokisa tsamaiso ea PCR le nako ea ho boloka nako e telele haholo.
Tlhahiso: Sebelisa sistimi ea Real Time PCR bakeng sa liteko tsa PCR hang ka mor'a ho itokisa, 'me u se ke ua e tlohela ka thōko nako e telele haholo.
4.Maemo a amplification a PCR ha a tšoanelehe, 'me tatellano ea pele kapa mahloriso ha aa nepahala.
Tlhahiso: netefatsa ho nepahala ha tatellano ea pele 'me primer ha e so fokotsehe;haeba lets'oao la amplification le sa loka, leka ho theola mocheso o kenang 'me u lokise mahloriso a primer ka nepo.
5.Sistimi ea PCR ha e ea nepahala, kapa sistimi e nyane haholo.
Tlhahiso: Sisteme ea karabelo ea PCR e nyane haholo e tla etsa hore ho nepahala ha ho lemoha ho fokotsehe.Ho molemo ho sebelisa mokhoa oa karabelo o khothaletsoang ke sesebediswa sa PCR ho etsa teko ea Real Time PCR hape.
-
Animal Tissue Direct PCR kit (ntle le Sampling ...
-
Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (ntle le Sampl...
-
Animal Tissue DNA Isolation Kit DNA Extraction ...
-
Animal Total RNA Isolation Kit Total RNA Extrac...
-
Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolatio...
-
Kakaretso ea Plasmid Mini Kit Kakaretso ea Plasmid DNA Ex...
